血糖含量的测定——邻甲苯胺法（O-toluidine boric，TB法）

实验原理
血液中所含的葡萄糖，称为血糖。它是糖在体内的运输形式。目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法简单,其正常值：空腹全血为3.6～5.3毫摩尔/升（65～95毫克/分升），血浆为 3.9～6.1毫摩尔/升。后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高或过低, 结果较可靠, 其正常值：空腹全血为3.3～5.6毫摩尔/升（60～100毫克/分升），血浆为3.9～6.4毫摩尔/升（70～115毫克/分升）。本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应生成5－羟甲基－2－呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量。
试剂和器材
一、试剂
邻甲苯胺试剂：:称取硫脲1.5ｇ溶于750ｍL冰醋酸中, 加邻甲苯胺150ｍL及饱和硼酸40ｍL, 混匀后加冰醋酸至1000ｍL, 置棕色瓶中，冰箱保存。
葡萄糖标准溶液：5.0mg/mL，临用时稀释成1.0 mg/mL。
二、材料
人血清。
三、器材
具塞试管1.5×15cm（×8）；分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

取6支试管编号后，按下表顺序加入试剂：

 

管号	0	1	2	3	4	5
标准葡萄糖液(mL)	0.00	0.02	0.04	0.06	0.08	0.10
蒸馏水(mL)	0.10	0.08	0.06	0.04	0.02	0.00
邻甲苯胺试剂(mL)	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
A630

加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用1cm比色杯，试剂空白为参比，测定 630nm 处吸光值，绘制标准曲线。

二、样品测定

取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：

 

管号	对照	样品 ①	样品②
稀释的未知血清样品(mL)	0	0.10	0.10
蒸馏水(mL)	0.10	0.00	0.00
邻甲苯胺试剂(mL)	5.0	5.0	5.0
A630

加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用 1cm比色杯，试剂空白为参比，测定630nm 处吸光值，从标准曲线中可查出样品中血糖含量。

注意事项

邻苯甲胺法测定血糖具有操作简单,特异性较高的优点, 试剂成本也较低, 目前在教学实验或规模较小的基层医院用于测定血糖。但该法一般在浓酸高温条件下发生反应, 因此在做血糖测定时须多加注意。