血糖的测定(O-TB法和葡萄糖氧化酶法)(1)

一、改良的邻甲苯胺硼酸法(O-TB法)
要 求
1．了解血糖微量测定的基本原量。
2．掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。
3．复习血糖的来源、去路及其调节的有关理论知识。
原 理
葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成一绿青色的化合物，其颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量正成比，与进行同样处理的标准葡萄糖液相比较可求出样品中葡萄糖的含量。
正常血糖水平为80~120毫克/100ml，在糖尿病及肾上腺皮质机能亢进和脑下垂体机能亢进的患者血中葡萄糖含量可显著升高，饥饿时，血糖水平可下降。
试 剂
1．O-TB试剂
2．葡萄糖标准液(1.0毫克/毫升)。
器 材
1．硬质中试管三支。
2．刻度吸管：0.1毫升三支；5毫升一支。
操 作
取硬质中试管三支，分别标以1、2、3号，按下表操作：混匀后同时将三支试管置于100℃水浴中，如热5~6分钟后，取出用冷水冷却，在30分钟内用722型分光光度计在620nm比色。以空白管调零，分别测得A样和A标。

试剂(毫升)	管 号
	1(空白管)	2(样品管)	3(标准管)
蒸 馏 水	0.1
血 浆		0.1
葡萄糖标准液			0.1
O-TB试剂	5.0	5.0	5.0

计 算

每100毫升血浆中葡萄糖含量(毫克)

= ×０.１×1000= ×100

附注：如血中葡萄糖糖量过高，颜色太深，可于样品管中加倍加入O-TB试剂，加热冷却后比色，并将最后的计算结果乘2，即得每100毫升血浆中葡萄糖的含量。

试剂配制
1.O-TB试剂
冰醋酸 883.2毫升
硫脲 1.5克
邻甲苯胺 76.8毫升
硫脲在冰醋酸中溶解后加邻甲苯胺混合，再加饱和硼酸溶液40毫升。
充分混匀后放入褐色内贮存备用，一般可贮存几个月。
附：饱和硼酸溶液：称取硼酸6克溶于100毫升蒸馏水中，放置一夜过滤即可应用。
2.葡萄糖标准贮存液：每毫升10.0毫克，用0.25%安息香酸溶液配制。
3.葡萄糖标准应用液：每毫升1.0毫克，用0.25%安息香酸溶液将贮存液稀释十倍(3%三氯醋酸可代替安息香酸溶液)。
二、葡萄糖氧化酶法
原 理
在pH7.0条件下，葡萄糖氧化酶可催化血样中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及过氧化氢。后者在过氧化物酶的作用下与苯酚，4—氨基安替毗啉氧化缩合成红色醌式物质，在505nm处有最大吸收峰，标本中葡萄糖含量与吸光度成正比，可求得血样中葡萄糖含量。用本法测定葡萄糖具有高度特异性，因此其准确度远比O-TB法为高，更能反映了血中葡萄糖的真实含量，是为科研工作中常用的葡萄糖测定方法。随着试剂药盒的推广普及，此法也已广泛应用于临床检测。其反应过程如下：
葡萄糖氧化酶
β—D葡萄糖+O2+H2O D—葡萄糖酸+H2O2
过氧化物酶
H2O2+4—氨基安替吡啉+苯酚 H2O+红色醌式物质

操 作

取硬质中试管三支，分别标以1.2.3号，按下表操作：

 

	测定管	标准管	空白管
血清(或血浆)	0.02mL	/	/
葡萄糖标准液100mg/dL	/	0.02mL	/
酶、酚混合试剂	1.5mL	1.5mL	1.5mL

混匀后37℃保温15分钟，使用722型 分光光度计在505nm波长下比色，以空白管调零，分别测得A_样和A_标。

计 算

葡萄糖含量mg/dl= ×100

100为标准液浓度值mg/dl

试 剂

葡萄糖（氧化酶法）测定试剂盒