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常用试剂的配制(2)

作者:中华医学网发布时间:2017-10-14 06:58浏览:

6.0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液

巴比妥 1.84g

加蒸馏水 200ml 加热溶解

巴比妥纳 10.3g

叠氮纳 0.2g

加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。

7.磷酸盐缓冲液 (PB)

A 液: 为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH2PO4 · H2O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最后补加蒸馏水至 1000ml 。

B 液:为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g(或 Na2HPO4·12H2O 71.6g, 或Na2HPO4 · 2H2O 35.6g ), 加蒸馏水溶解,最后加水至 1000ml。若再加蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。

8.0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液(BBS)

硼酸钠(Na2B4O7.10H2O) 0.46g

硼酸(H2BO3) 0.51g

加蒸馏水至100ml 溶解。

9.PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液(PBS)

配制方法一:

0.2mol/L Na2HPO4( Na2HPO4·12H2O 71.6g加蒸馏水至1000ml)

0.2mol/L NaH2PO4(NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml)

取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。

PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。

配制方法二:

甲液(0.1mol/LKH2PO4溶液):KH2PO413.608g,加蒸馏水至1000ml。

乙液(0.1mol/L Na2HPO4溶液):Na2HPO435.814g,加蒸馏水至1000ml。

取甲液19ml,乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。

10.0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液

   Na2CO3 1.59g

NaHCO3 2.93g

加蒸馏水至1000ml。ELISA实验包被用。
11.0.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA(牛血清白蛋白)

取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。ELISA实验封闭用。

12.PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。

0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml

0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml

加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。

13.底物溶液

pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml,再加入30%的H2O2 (1μl/ml)溶解后即为ELISA底物液,临用前配制,避光保存。

14.2mol/L硫酸

浓H2SO4(36N)取 1ml36N的H2SO4缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L,用于ELISA实验终止反应。

15.清洁液的配制

清洁液分高、中、低液三种。

低浓度清洁液

   重铬酸钾 100g

水 750ml

硫酸 250ml

中浓度清洁液

重铬酸钾 60g

水 300ml

硫酸 460ml

高浓度清洁液

 重铬酸钾 100g

水 200ml

硫酸 800ml

先将重铬酸钾倒入自来水中,然后加入浓硫酸,边加硫酸边用玻璃棒搅拌。由于加入浓硫酸后产生高热,故加酸时要慢,溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。

配制好的清洁液,应存于有盖的玻璃溶器内。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥,如果清洁液经过长期使用已呈黑色,表明已经失效,不宜再用。由于清洁液有强腐蚀性,故操作时要十分注意。

16.PH6.4 l/l5mol/ml磷酸盐缓冲盐水(PBS):

(1)l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液

KH2PO4 9.04g

蒸馏水 加至1000ml

(2)l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液

Na2HPO4·2H2 O 11.87g

(或 Na2HPO4·l2H2 O 23.86g

蒸馏水 加至1000ml

(3)PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水(PBS)

l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73ml

l/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27ml

NaCl 0.5g

混匀溶解即可。

17.柯氏试剂(靛基质试剂)

(1)成份

纯戊醇 150ml

浓盐酸 50ml

对二甲基氨基苯甲醛 10g

(2)制法:将对二甲基氨基苯甲醛加入纯戊醇内,使其溶解。将浓盐酸一滴滴慢慢加入,边加边摇,不能加得太快,以致温度升高溶液颜色变深。

(3)用途:测定细菌能否产生吲哚。