当前位置：主页 > 生物医药 > 文章内容

植物组织培养基母液配制的若干关键环节

作者：中华医学网发布时间：2017-10-13 21:37浏览：次

植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中.

培养基母液，也叫浓缩贮备液.它是以培养基配方配制成的高倍的浓缩液，不同组分母液，它的浓缩倍数不同，一般最低为10倍，高的有50倍、100倍、200倍，甚至1000倍.母液是一个方法比较简便、用量比较准确且被广泛采用的配制方法.本文就如何掌握培养基母液配制的操作要领作一阐述，以供参考.

以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1)

表1 MS培养基母液的配制

成分	规定用量/mg.L^-1	扩大倍数	称取量/ mg	母液定溶体积/ml	配1LMS培养基吸取量/ml
大量元素 KNO₃ NH₄NO₃ MgSO₄·7H₂O KH₂PO₄ CaCl₂·2H₂O 微量元数 MnSO₄·4H₂O ZnSO₄·7H₂O H₃BO₃ KI Na₂MoO₄·2H₂O CuSO₄·5H₂O CoCl₂·6H₂O 铁盐 Na_{2 -EDTA} FeSO₄·7H₂O 维生素和氨基酸甘氨酸 Vit.B₁ Vit.B₆ 肌醇	1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 37.3 27.8 2.0 0.1 0.5 100	20 20 20 20 20 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 100 100 50 50 50 50	38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 6200 830 250 25 25 3730 2780 100 5 25 5000	1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 500 500 500 500	50 50 50 50 50 1 1 1 1 1 1 1 10 10 10 10 10 10

1 大量元素和微量元素母液的配制

按规定用量,称取所需的各种药品，在配制时为减少工作量，可以把几种药品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中（见表1）.但由于各种药品的混合，可能发生反应，生成沉淀物，以致母液失效.为避免类似现象发生，在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时，可采用如下2种做法加以解决：①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物，按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品，待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品，以此类推；②使每种成份分别完全溶解，再把它们彼此混合.

2 铁盐母液的配制

铁盐的成份含硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）.这两种化合物的溶解和混合较为严格，必须按如下方法配制，否则将会产生沉淀.该方法是：分别溶解FeSO4·7H2O和 Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使之完全溶解，冷却，将2种溶液混合，调PH至5.5，用蒸溜水加至所需容积，棕色瓶保存于冰箱之中.

3 植物生长调节物质母液的配制

植物生长调节物质是培养基的重要组分之一，一般是植物激素类物质，如生长素类的IAA、IBA、NAA，赤霉素类的GA3，细胞分裂素类的2，4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水，因此配制方法也各不相同：①IAA，IBA和GA3先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后，存放在冰箱中；②NAA可用热水或少量95%酒精溶解，再加水定容至所需容积；③2，4-D可溶于少许1mol·L-1的NaOH溶液中，然后加水定容；④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解，再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中，然后加水定容.

植物生长调节物质浓度通常用ppm（mg·ml-1）和mol·L-1表示，在配制母液时，常以ppm较为方便，一般配制成0.5ppm的母液，这个浓度既便于计算，也可避免冷藏时形成结晶.

4 有机附加物母液的配制

在植物组织培养时，培养基中往往要加入一些有机附加物，如椰子汁，以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的，在配制时，要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质，过滤，然后置塑料瓶中贮存于的-200c的低温冰箱内.