质粒酶切电泳注意事项

仅条带看不清，连marker都看不清。牢记，否则你会认为自己的实验失败。
我还认为是EB加少了。
2 1％agrose 凝胶的配制， 50*TAE BUFFER.稀释成1×。0.3g 加30ml,微波炉中 40s, 不能太长，否则液体会蒸发， 量会减少。 等待融化的胶冷却之后，再加1ul 的EB.扑胶。半个小时后，待胶凝固之后， 将凝胶加托放到电泳液中。电泳30分钟。
3 加样时loading buffer 10*,要稀释成1×。Marker 要用10ul. 一定要注意加样顺序。

酶切反应注意事项：
1质粒的量一定要过量。 50ul洗脱液的小抽质粒要用16ul. E:2ul. Buffer:10*2ul. 反应体积20ul.正常情况下37度反应2到3小时足够。否则， 质粒量少，你会看不到条带。

质粒抽提注意事项：
1 质粒抽提前要准备好试剂，要看每一步用到的试剂量是否够，p1 ＆洗脱液放到4度。
2注意每一步都要编上序号，按序号操作。最终保证质粒＆菌液对应。

挑选单克隆菌落时注意事项：
1准备好无抗生素LB液体培养基，抗生素 ，7ml (非4ml)管。
2选单克隆时可以选取边缘颗粒较大的菌落。
3菌落通常很密集很小，很难挑选单克隆。

转化注意事项：
1超净台一定要事先照紫外。
2质粒的选取一定要无菌。
3准备好：质粒，转化试剂盒
质粒5ul(0.3ug/ul)有些多，以后用1ul
试剂A:10ul,无菌水40ul,大肠杆菌50ul.冰上20min,室温10min. 加无抗生素的LB液体培养基，在37 度，200转，摇床上摇45min。取50ul铺皿。铺的效果不好。
质粒转化后铺皿与连接产物转化后铺皿的效果相差很大。 连接产物铺皿后菌落一般都很大，而质粒转化后铺皿菌落一般都很小，而且很密集。