gⅥ-cDNA融合噬菌体ELISA

[器材和试剂]

通用设备及试剂以及以下的设备和试剂：

● 链霉素包被的微量浓度测定板(Pierce)

● T和 2mol/L

● 生物素抗原选择出的(BAS)噬菌体和(或)免疫亲和选择出的(1AS)噬菌体

● 生物素配体(仅供BAS噬菌体使用)

● 生物素捕获抗体，诱饵抗血清及预免疫血清(仅供IAS噬菌体使用)辣根过氧化物酶(HRP)/抗M13连接物

● 3，3’，5，5’—四甲基联苯胺(TMB)底物试剂盒(Pierce)

● 2 mol/L H2S04

[方法]

1．用200ul T冲洗链霉素包被的微量浓度测定板的每个孔3次。

2．在2mol/L中稀释生物素配体(BAS噬菌体—ELISA)或生物素捕获抗体(ISA噬菌体—ELISA)，直到终浓度为10—50nmol/l，再加100ul这种溶液到农度测定板中的每个孔中。

3．在室温下孵育浓度测定板1小时。

4。用200ul T冲洗每个孔5次。

5．在2mol/L中稀释噬菌体溶液到浓度为1×1011TU/ml，在第一次用来稀释IAS融合噬菌体的2mol/L中加入诱饵血清或预免疫血清，再将100ul这种悬浮液转移到每个孔中。

6．在室温下孵育浓度测定板2小时。

7，用200ul T冲洗每个孔5次。

8。加100ul HRP/抗M13连接物(2M稀释为1：5000)。

9。室温下孵育浓度测定板l小时。

10．用200ul T冲洗每个孔5次。

11．向每个孔中加100ul TMB底物溶液。

12．室温下孵育浓度测定板15～30分钟(或直到颜色发生变化)。

13．用100ul 2 mol/L H2SO4停止反应。

14．在450nm读吸收值。