采用ELISA来定量测定结合的噬菌体

[器材和试剂]

● 洗涤缓冲液

● 结合缓冲液

● 辣根过氧化物酶(HRP)连接的抗M13单克隆抗体(mAb) (Amersham Biosciences)

● HRP底物㈠OPD(邻苯二胺，o-phe-nylenediamine) (Sigma)或AT 【2，2-连氮基-双-(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺 酸)，2，2’-azinobis(3-ethylbenzothiazo-line-6-sulfonic acid)】 (Kinkegaard和Perry)

● 预先准备的噬菌体包被的微孔板

[方法]

1，每块板用洗涤缓冲液洗涤3次。

2．用结合缓冲液将HRP联结的抗M13单克隆抗体做1：5000稀释，每孔加入100ul，室 温下孵育30分钟。

3．每块板用洗涤缓冲液洗涤3次。

4．每孔加入lOOglOPD显色，不超过15分钟后用50ul 2．5mol/L的HzS04终止反应。5．检测每块板在492nm处的吸光度。