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酶免疫细胞化学染色操作指南-1

作者:中华医学网发布时间:2017-10-13 08:02浏览:

一、材料和试剂

1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。

2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。

3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。

4、0.01M pH7.4 PBS

5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)

6、AEC底物

(1)底物缓冲液(20X) PH 4.6

醋酸(分子量60.6) 30.6ml

Triton X-100

醋酸钠 3H2O(分子量136.1)66.68克

加蒸馏水到960ml,调pH到4.6,最后加蒸馏水到总体积1000ml。

(2)AEC(20X)

AEC 15mg/ml,溶在DMF(二甲基甲酰胺,分子式HCOH(CH3)2 分子量73.10中)

(3)0.6% H2O2(20X)

临用时,(1)(2)(3)各50ul,在1ml双蒸馏水中混匀30分钟内有效。

7、DAB(即DAB-4HCL)

(1)1.5克DAB在100ml水溶液中(20X)

(2)1M Tris(20X),用HCl调PH到7.4

(1)(2)(3)各滴加入1ml二蒸水中,新鲜配,避光,30分钟内有效。溶解后(可加热到50℃),加水合氯醛50克(水合氯醛Chloral Hyclrate,分子量165.4),枸橼酸1克,充分溶解,于棕色瓶中,室温或400C保存。

8、苏木素复染液

苏木素 1克

碘酸钠 0.2克

钾矾 50克

水 1000ml

9、含10%及2%小牛血清的DMEM培养液。

10、3% H2O2:30% H2O21份,加9份双蒸水,临用时配。

11、细胞抗原玻片及96孔细胞抗原板

12、封片液:1克明胶,溶于30ml 35℃水中,加入35ml甘油(或用甘油封片)和650mg石碳酸(先溶于0.6ml水中)。

二、细胞内源过氧化物酶阻断(使用HRP标记二抗或SP法时必须阻断)

1、从冰箱取出细胞片或细胞板,置室温或37℃ 10-15分钟,使恢复温度。