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正常视网膜米勒细胞原代培养

作者:中华医学网发布时间:2017-10-12 11:24浏览:

正常视网膜米勒细胞原代培养



实验材料:

1. 材料来源:人眼、兔眼或者猪眼等;

2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素,pH7.2;

3. 消化液:0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明质酸酶混合消化液;

4. 消毒无菌的手术器械若干;



实验方法:

1. 取材

(1)取自人的供体眼球;

1) 经常规消毒程序消毒后,于锯齿缘后约1mm处环形切开眼球,去除前段及玻璃体;

2) 用无齿小镊子轻轻剥取视网膜组织,并用眼科小剪子剪去视乳头周围的视网膜及血管;

3) 用液稍洗,去除黏附的色素上皮细胞。置于盛有平衡盐溶液的培养皿中;

(2)取自兔的供体眼球:当取出视网膜组织后,在解剖显微镜下用眼科小剪刀剪去髓放线部分及血管;

2. 原代培养;

1) 在处理完毕的视网膜组织中加入胰蛋白酶和透明质酸酶混合消化液,于37℃调间隙消化30min;

2) 用有血清培养液终止消化。经吹打后,将细胞悬液离心(800r/min)5min;

3) 用培养液重新悬浮细胞,并吸走絮状的纤维样物质;

4) 按4×104~6×104个细胞/ml的密度进行接种;

5) 以常规方法培养。24h后取出培养瓶,置换培养液,以去除没有贴壁的其它细胞;

6) 每周换液2次,在细胞分裂增长至基本融合成单层时传代