四乙基罗丹明标记抗体﹠四甲基异硫氰酸罗丹明标记抗体

四乙基罗丹明标记抗体：
1.称取1g RB200及2g PCL5放在乳钵中于通风橱中研磨5min；
2.加入10ml无水丙酮，不断搅拌，5min后过滤，用滤液进行标记抗体。剩
余部分吸附在滤纸上，于4℃干燥保存；
3.量取一定量的浓度为20mg/ml的抗体，按1：1：1的比例分别加入等体积
的生理盐水和0.5mol/L pH9.0的碳酸盐缓冲液来稀释抗体；
4.再加入0.1ml的RB200溶液，边滴加边搅拌，在0—4℃中结合12—18h；
5.用生理盐水透析5—7h，经葡萄糖凝胶G-50柱层析，除去游离荧光素，
分装，保存于4℃备用；
四甲基异硫氰酸罗丹明标记抗体：
1.量取10ml浓度为6mg/ml的IgG，加在浓度为0.1mol/L pH9.5的碳酸盐缓冲液中透析过夜；
2.将四甲基异硫氰酸罗丹明按每毫克IgG加入5—20μg的比例溶于浓度为1mg/ml二甲基亚砜中，取此溶液300μl，逐滴加入抗体溶液中，同时用电磁搅拌；
3.在室温中避光搅拌2h；
4.把结合物移入直径3cm，高30cm的Bio-Gel P-6层析柱，此层析柱已用0.01mol/L pH8.0的平衡过，流速为1.5ml/min；
5.收集到的先流出的红色结合物即为标记抗体，分装后于4℃保存备用