琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞方法步骤

1．用不同方法诱导细胞调亡后，取106调亡细胞，置1.5ml离心管中，用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟，去上清液。加入 100μl含5mol/L异硫氰酸胍，100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0，在旋涡混悬器上混悬20秒钟，破坏细胞，变性蛋白质。

2．加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的水溶液，混匀；加入300μl 100％乙醇，4℃保存过夜。

3．在微量离心机上全速离心30分钟，去上清液。加入75％乙醇同样离心洗涤沉淀物2次。用20μl含100μg/ml无DNA酶的RNA 酶的TE缓冲液消化RNA，37℃ 30分钟。加入10μl甘油和少量溴酚蓝，直接点样。

4．用50ml TAE溶解2g琼脂糖，加入0.25μg/ml溴乙啶。倒板后加样，用100bp DNA标记物作为标记。25mV电泳过夜。在紫外线下观察结果。调亡细胞的DNA呈相差200bp的条带的梯形图。