一、过氧化物酶染色
染色原理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。
试剂器材
1.1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。
2.亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。
3.1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。
4.稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。
5.瑞氏(Wright)染色液。
6.新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。
操作步骤
1.取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。
2.在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。
3.自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。
4.自来水冲洗，待干，用油镜镜检。
注意事顶
1.血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。
2.TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。
3.H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。
4.染色液pH应为5.5。
5.试剂应置于低温暗处，防止因光线照射而失效。
实验评价
1.POX染色是鉴别急性白血病类型最重要最常用的细胞化学染色方法，临床上不管是哪种急性白血病，首先做POX染色，以区分是急性髓细胞白血病还是急性淋巴细胞白血病。如变异型的急性早幼粒细胞白血病极易误诊为急单、急粒中如以小型原粒细胞为主者极易误认为急淋等。在判读细胞POX染色结果前，要先观察成熟粒细胞是否呈强阳性，以判断染色是否成功。
2.POX阳性说明是急性髓细胞白血病(阳性较强常见于急性粒细胞白血病，弱阳性常见于急性单核细胞白血病)；阴性说明各种急性白血病的可能性均有。因原始细胞多表现为阴性反应，故本法对白血病的分型有一定的局限性，特别是对某些分化极差的白血病，可能失去鉴别意义。
3.四甲基联苯胺法操作简单，染色效果较好，试剂无致癌作用，但对染液pH要求较高，如pH<5.0会导致假阳性结果。
二、氯乙酸AS-D荼盼醋酶染色
染色原理
血细胞内的氯乙酸AS-D荼酚酯酶(naphythol AS-D chloroacetate esterase, NAS-DCE)水解基质液中的氯乙酸AS-D荼酚，产生AS-D荼酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。
试剂器材
1.10%甲醛甲醇固定液
甲醛 25mL
甲醇 75mL
混合后置4℃冰箱保存。
2.Veronal醋酸缓冲液
甲液：
醋酸钠(含3H2O) 1.94g
巴比妥钠 2.94g
蒸馏水 100mL
乙液：
0.1mol/L盐酸 取盐酸(比密1.190g/L)0.85mL加蒸馏水至100mL。
取甲液50mL，乙液45mL，再加蒸馏水135mL，用1mol/L盐酸调pH至7.5~7.6。
3.基质液
氯乙酸AS-D荼酚 100mg
丙酮 0.5mL
蒸馏水 5mL
Veronal醋酸缓冲液 5mL
固酱紫GBC盐 10 mg
不必过滤立即染色，一次用完。
4.苏木素染液。
操作步骤
1.固定新鲜干燥的涂片在固定液中30 s~1min，蒸馏水冲洗，待干。
2.显示放入基质液(37℃)30min，自来水冲洗。
3.复染苏木素染液复染5mn，自来水冲洗，待干，镜检。
注意事顶
1.冬季室温低，茶酚和固酱紫GBC盐不易溶解，可放37℃温箱促溶。
2.茶酚在丙酮中溶解后再加其他液体。
3.NAS-DCE不被氟化钠抑制。
4.此酶染色后的标本易脱色，不能长期保存。
实验评价
NAS-DCE阳性反应几乎仅出现在粒细胞、较POX染色更具有特异性，因此又称为"粒细胞酯酶"、"特异性酯酶"。故该酶较特异地识别粒细胞系，有助于急粒和急单的鉴别，特别是对某些POX反应较强的单核细胞白血病鉴别意义更大。