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体内DPSCs的成牙和成骨分化

作者:中华医学网发布时间:2017-10-12 08:08浏览:

体内DCs的成牙和成骨分化
试剂和材料:
1.无镁和钙的平衡盐溶液(A);
2.MSC培养基:含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM,添加15%胎牛血清,0.1mmol/L左旋抗坏血酸磷酸盐,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素;
3.胰蛋白酶-EDTA溶液:0.05%胰蛋白酶,0.54mmol/L(0.2%)EDTA,无镁和钙的平衡盐溶液溶解;
4.冻存管,1.8ml;
5.合适的载体(羟基磷灰石/磷酸三钙载体,HA/TCP);
实验方法:
1.用MSC培养基培养,直到细胞到达90%汇合;
2.用A洗培养皿,洗3次;
3.加足够体积的胰蛋白酶-EDTA溶液,37℃孵育;
4.确定80%的细胞已从培养容器表面脱离,然后加MSC培养基;
5.500g,离心6min;
6.倒掉上清,用MSC培养基重悬细胞;
7.细胞计数;
8.将重悬于MSC培养基的(2-4)&time106个细胞和载体混合,置于1.8ml冻存管中;
9.37℃旋转孵育1h;
10.无菌条件下,将混合物移植到免疫力低下的小鼠皮下。我们通常使用N1H的bg-nu/nu-xid小鼠进行移植;
11.在合适的时间点,收集移植物,组织学检测。(在HA/TCP载体和bg-nu/nu-xid小鼠体系中,8周的时间足够DCs和SHED形成充分的矿化基质。收集的时间点主要决定于体系。)