琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 纯度与完整性

一、原理

• 纯度高、未降解的总 RNA 电泳后可见清晰的 28S 和 18S 两条主带，且 28S 亮度约为 18S 的2 倍。
• 若 RNA降解，条带变模糊、弥散，甚至呈涂抹状。
• 有DNA 污染时，会出现高于 28S 的额外条带或整体拖尾。
• 有蛋白质 / 多糖污染时，点样孔发亮、条带阻滞不清。
   
  据此可判断 RNA 的纯度与完整性。

二、操作步骤

1. 配制凝胶

    

   配制含核酸染料的变性琼脂糖凝胶（常用甲醛变性胶），避免 RNA 二级结构影响迁移。
    
2. 样品处理

    

   RNA 样品与上样缓冲液（含变性剂、示踪染料）混匀，短暂变性后迅速冰浴。
    
3. 上样电泳

    

   将样品加入点样孔，以低电压、恒压电泳，避免高温降解 RNA。
    
4. 结果观察

    

   电泳结束后在凝胶成像系统下观察条带。
    
5. 结果判断

    

   28S、18S 条带清晰、比例适宜、无弥散涂抹、无高分子量杂带，表明 RNA 纯度高、完整性好。