紫外分光光度法检测 DNA 纯度的具体步骤

1. 预热仪器

    

   打开紫外分光光度计，预热 15～30 min，选择波长 260 nm、280 nm、230 nm。
    
2. 配制空白对照（调零）

    

   用与溶解 DNA 相同的ddH₂O 或 TE 缓冲液加入比色皿，分别在 260 nm、280 nm、230 nm 处调零。
    
3. 稀释 DNA 样品

    

   取适量 DNA 模板，用空白缓冲液稀释（一般稀释 50～100 倍，使 OD 值在 0.1～1.0 之间）。
    
4. 测定吸光度

    

   将稀释后的 DNA 样品加入石英比色皿，依次测定并记录：
    
   • OD₂₆₀（核酸吸收）
   • OD₂₈₀（蛋白质吸收）
   • OD₂₃₀（多糖、盐、有机溶剂吸收）
    
5. 计算纯度比值
    
   • OD₂₆₀/OD₂₈₀：判断蛋白 / 酚污染
   • OD₂₆₀/OD₂₃₀：判断多糖、盐离子污染
    
6. 结果判断
    
   • DNA 纯品：OD₂₆₀/OD₂₈₀ ≈ 1.8
   • OD₂₆₀/OD₂₈₀ ＜1.6：蛋白 / 酚污染
   • OD₂₆₀/OD₂₈₀ ＞1.9：RNA 污染
   • OD₂₆₀/OD₂₃₀ ＜2.0：多糖 / 盐 / 有机溶剂污染
    
7. 清洗比色皿，关机

    

   用去离子水冲洗比色皿，干燥后收好仪器。
    

极简背诵版（简答直接写）

1. 仪器预热，用溶解 DNA 的缓冲液调零。
2. 稀释 DNA 样品，测定 OD₂₆₀、OD₂₈₀、OD₂₃₀。
3. 计算 OD₂₆₀/OD₂₈₀和 OD₂₆₀/OD₂₃₀比值。
4. 根据比值判断 DNA 纯度。