模板 DNA 纯度检测方法（实验考试 + 实操通用版）

一、最常用、最核心：紫外分光光度法（测 OD 值）

1. 关键波长

• 260 nm：核酸（DNA/RNA）特征吸收峰
• 280 nm：蛋白质、酚类等吸收峰
• 230 nm：多糖、盐离子、腐殖酸等吸收峰

2. 纯度判断标准

• OD260/OD280 ≈ 1.8：DNA 纯度良好
  • ＞1.9：可能有 RNA 污染
  • ＜1.6：明显蛋白质 / 酚类污染
   
• OD260/OD230 ＞ 2.0：纯度好
  • ＜2.0：多糖、盐离子、有机溶剂污染
   

3. 浓度计算

• DNA 浓度 (μg/μL) = OD260 × 稀释倍数 × 0.05

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二、琼脂糖凝胶电泳检测（直观判断完整性与污染）

观察要点

1. 主带清晰、整齐：DNA 完整
2. 无弥散拖尾：无降解
3. 无 RNA 亮带（前端模糊条带）：无 RNA 污染
4. 无点样孔发亮：无蛋白质 / 多糖残留

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三、荧光染料法（Qubit，更灵敏、抗干扰）

• 特异性结合 DNA，不受蛋白、盐影响
• 给出准确有效浓度
• 配合 OD 值可判断抑制剂是否存在

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四、PCR 法间接判断（最贴近实际用途）

• 能扩增出特异性条带：纯度基本合格
• 扩不出、非特异强、重复性差：可能存在Taq 酶抑制剂（如酚、多糖、血红素等）

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极简背诵版（考试简答）

1. 紫外分光光度法：测定 OD260/OD280≈1.8、OD260/OD230＞2.0 为纯度良好。
2. 琼脂糖凝胶电泳：观察条带是否清晰、无降解、无 RNA / 蛋白污染。
3. 荧光定量法（Qubit）：精准测 DNA 浓度，排除杂质干扰。
4. PCR 扩增：验证模板是否含抑制剂，判断实际可用纯度。