调理作用和 ADCC 的发现,完全依赖当时一批经典免疫学实验技术,很多方法至今还在教科书里。下面按两个作用分开,只列关键技术 + 对应发现,方便记忆。
一、调理作用发现中用到的重要实验技术
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细菌吞噬试验(Phagocytosis assay)
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核心技术:体外观察白细胞吞噬细菌
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用途:证明免疫血清能显著增强吞噬能力,最早发现 “调理” 现象。
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血清调理活性测定
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方法:对比正常血清 vs 免疫血清的促吞噬效率
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意义:确定血清中存在特异性 “调理素”。
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玫瑰花环试验(Rosette formation assay)
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方法:红细胞 / 细菌包被抗体后,与吞噬细胞混合形成花环样聚集
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意义:直接证明抗体通过 Fc 段结合吞噬细胞表面受体。
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抗体片段分离技术(蛋白酶酶切:木瓜蛋白酶、胃蛋白酶)
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切出 Fab 段、Fc 段
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证明:Fab 结合抗原,Fc 介导调理吞噬。
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免疫血清分离与纯化
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盐析、离子交换层析
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确定起作用的是IgG 类抗体。
二、ADCC 作用发现中用到的重要实验技术
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细胞毒试验(Cytotoxicity assay)
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经典:⁵¹Cr 释放法
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标记靶细胞→加抗体 + 淋巴细胞→测上清放射性
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直接定量靶细胞裂解,ADCC 发现的核心技术。
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补体灭活处理
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56℃加热 30min 灭活补体
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证明这种杀伤不依赖补体,是细胞介导的。
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免疫细胞分离技术
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密度梯度离心(Ficoll)分离淋巴细胞
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逐步剔除 T/B/ 单核细胞,最终锁定NK 细胞是主要效应细胞。
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抗体 Fc 段功能阻断实验
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用 Fc 受体阻断剂、抗 FcR 抗体
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证明 ADCC 必须通过抗体 Fc 段与细胞 Fc 受体结合。
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单克隆抗体制备与流式细胞术
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鉴定 NK 细胞标志(CD16/FcγRIII)
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明确CD16 是介导 ADCC 的关键受体。
三、极简总结(考试答题版)
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调理作用依赖:
吞噬试验、玫瑰花环试验、抗体片段酶切、血清纯化
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ADCC 作用依赖:
⁵¹Cr 释放细胞毒试验、补体灭活、免疫细胞分离、Fc 受体阻断、流式细胞术