当前位置:主页 > 生物医药 > 文章内容

调理作用和ADCC作用的发现过程中涉及哪些重要的实验技术?

作者:中华医学网发布时间:2026-04-10 09:46浏览:

调理作用和 ADCC 的发现,完全依赖当时一批经典免疫学实验技术,很多方法至今还在教科书里。下面按两个作用分开,只列关键技术 + 对应发现,方便记忆。
 

一、调理作用发现中用到的重要实验技术

 
  1. 细菌吞噬试验(Phagocytosis assay)
     
    • 核心技术:体外观察白细胞吞噬细菌
    • 用途:证明免疫血清能显著增强吞噬能力,最早发现 “调理” 现象。
     
  2. 血清调理活性测定
     
    • 方法:对比正常血清 vs 免疫血清的促吞噬效率
    • 意义:确定血清中存在特异性 “调理素”。
     
  3. 玫瑰花环试验(Rosette formation assay)
     
    • 方法:红细胞 / 细菌包被抗体后,与吞噬细胞混合形成花环样聚集
    • 意义:直接证明抗体通过 Fc 段结合吞噬细胞表面受体。
     
  4. 抗体片段分离技术(蛋白酶酶切:木瓜蛋白酶、胃蛋白酶)
     
    • 切出 Fab 段、Fc 段
    • 证明:Fab 结合抗原,Fc 介导调理吞噬
     
  5. 免疫血清分离与纯化
     
    • 盐析、离子交换层析
    • 确定起作用的是IgG 类抗体
     
 

 

二、ADCC 作用发现中用到的重要实验技术

 
  1. 细胞毒试验(Cytotoxicity assay)
     
    • 经典:⁵¹Cr 释放法
    • 标记靶细胞→加抗体 + 淋巴细胞→测上清放射性
    • 直接定量靶细胞裂解,ADCC 发现的核心技术
     
  2. 补体灭活处理
     
    • 56℃加热 30min 灭活补体
    • 证明这种杀伤不依赖补体,是细胞介导的。
     
  3. 免疫细胞分离技术
     
    • 密度梯度离心(Ficoll)分离淋巴细胞
    • 逐步剔除 T/B/ 单核细胞,最终锁定NK 细胞是主要效应细胞。
     
  4. 抗体 Fc 段功能阻断实验
     
    • 用 Fc 受体阻断剂、抗 FcR 抗体
    • 证明 ADCC 必须通过抗体 Fc 段与细胞 Fc 受体结合
     
  5. 单克隆抗体制备与流式细胞术
     
    • 鉴定 NK 细胞标志(CD16/FcγRIII)
    • 明确CD16 是介导 ADCC 的关键受体
     
 

 

三、极简总结(考试答题版)

 
  • 调理作用依赖:
     
    吞噬试验、玫瑰花环试验、抗体片段酶切、血清纯化
  • ADCC 作用依赖:
     
    ⁵¹Cr 释放细胞毒试验、补体灭活、免疫细胞分离、Fc 受体阻断、流式细胞术