荧光染料Real Time PCR的引物设计

引物的设计相对于普通的PCR来说，还是有一些更为严格的要求：

1、引物的退火温度要高，一般要在60度以上；

2、引物的产物大小不要太大，一般在80-250bp之间都可；

3、引物一般要设计在目的基因中跨内含子的位置，这样可以避免在存在DNA污染的情况下，对目的片断的额外的扩增；

4、对于定量PCR来说，特别是在使用sybr green的情况下，引物二聚体的存在对结果的干扰较大，所以在选择引物时要尽量避免容易形成二聚体的引物。