绒毛直接制备染色体
一、 材料
(一) 有产前诊断适应症的孕7~10周经阴道抽取的绒毛5~10mg。
(二) 自然流产出的对难免流产刮宫出的胚胎绒毛组织。
二、 方法
(一) 取到的绒毛立即放入生理盐水或1640培养基中,漂洗数次,将凝血洗净。
(二) 在立体显微镜下挑选绒毛,去除蜕膜组织。
(三) 加1640培养基4ml,秋水仙素0.1ug/ml,培养1~1.5小时。
(四) 低渗:倒去培养液,加1%枸橼酸钠2ml,37℃低渗30分钟。
(五) 固定:以3:1甲醇冰醋酸固定2次,每次30分钟以上。
(六) 离解:把绒毛取出,放入一小皿中,加60%冰醋酸0.5ml离解3~5分钟。
(七) 制片:加入甲醇数滴涂片。
(八) 染色:做带及分析同外周血。
三、 注意事项
(一) 要认真挑选绒毛,最好是一级绒毛,这是获得中期分裂相的关键。
(二) 操作要轻,以免染色体丢失。
(三) 如为嵌合体,应作中孕羊水培养作进一步确诊。