羊水细胞培养染色体制备
一、 适应症:
有产前诊断适应症的孕18~22周的孕妇。
二、 培养前准备
(一) 实验器皿及无菌室准备同外周血培养。
(二) 把抽取的羊水放水尖底离心管中,以每分1500转速度离心8分钟备用。
三、 培养
(一) 把F102ml加胎牛血清1ml及羊水离心沉淀物0.5ml加入灭菌的25ml方瓶中,反口瓶塞塞紧,37℃温箱中静置培养5~7天。
(二) 换液:5~7天后在显微镜下观察细胞生产情况,并在无菌条件下,将原培养液倒出加入等量的新鲜培养基及胎牛血清,继续37℃培养箱中培养。
(三) 继续培养1~2天,每天观察细胞生长情况,一般9~13天可收获细胞,收获加秋水仙素阻断细胞分裂,继续培养6小时收获。
四、 收获细胞
(一) 细胞的收集:将培养液倒出,用竹片或吸管将贴壁细胞轻刮下,并以生理盐水冲洗2次,把细胞放入尖底离心管中,离心、去上清液。
(二) 低渗:用已预温的0.4%氯化钾及0.4%枸橼酸钠1:1液2ml,37℃低渗30分钟。
(三) 离心、预固定、固定、制片及镜检分析同外周血培养。
五、 注意事项
(一) 所用培养瓶必须认真擦洗、消毒、培养前5天要严格静置,否则细胞不贴壁。
(二) 羊水必须是新鲜抽取的,一般离体后不超过一小时。
(三) 换液后每天要观察细胞生长情况,掌握好细胞收获时间,否则收不到中期分裂相。
(四) 操作要轻、稳,避免染色体丢失,低渗时间要掌握好,避免染色体不分散或过分分散而影响分析。