药品卫生检验方法（之一）

 【有 效 性】有效

【法规名称】药品卫生检验方法（之一）

【颁布部门】卫生部

【颁布日期】1984年10月31日

【实施日期】1984年10月31日

【正　　文】

药品卫生检验方法

第一章  药品卫生检验通则

１．供试品取样应有一定数量，以使检验结果具有代表性。因此，正常的供试品，一般每批应随机抽取两瓶或两盒以上的包装单位。检验时，每次最少应分取两瓶（盒）以上的样品共１０克或１０毫升，中药蜜丸至少应分取４丸以上共１０克；贵重或微量包装的供试品，取样量可酌减。

肉眼能看出发霉生虫变质、活螨的样品，应判为不合格，无需再作抽样检验。

４．供试品在检验前，应严格保持包装的原有状态，不得启开，防止再污染。并放在阴凉干燥处，防止微生物再繁殖，以免影响检验结果。凡已将原包装启开，则无代表性，应另行取样。

６．供试品稀释后，须在１—２小时内操作完毕，防止微生物繁殖或死亡。

８．从供试品检出大肠杆菌或其它致病菌的报告发出起，该菌种保存一个月备查。如有疑问，可送药检部门或上一级药检单位复核。

１．凡固体样品，应称取１０克，加在１００毫升稀释剂（生理盐水或磷酸盐缓冲液）中，经充分研磨或振摇制成供试液。液体样品，则可量取１０毫升加在９０毫升稀释剂中，混匀后成供试液。

取供试液１０毫升，以无菌手续放在灭菌的尖底刻度离心管中，经每分钟３５００转以上离心沉淀３０分钟，用灭菌毛细吸管吸取上清液弃掉，并留下管底的２毫升残余液，将其全部洗净加在培养基中，进行增菌检验。含有不溶性药渣的样品稀释液，可均匀吸取１０毫升放在离心管中，先经每分钟５００转左右离心沉淀５分钟，取其上清液放在另一灭菌尖底刻度离心管中，再经每分钟约３５００转以上离心沉淀３０分钟，轻轻吸取上清液弃掉，取其管底的２毫升残余液全部洗净加在培养基中，增菌检验即得。

或称取供试品２．５克，分别量取液体石蜡１０毫升，吐温—８０．１０毫升，稀释剂３０毫升。先将供试品置乳钵中，边研磨边滴加液体石蜡；然后再边研磨边滴加吐温—８０，研磨均匀后；再边加入稀释剂边研磨，开始每次约１毫升，待起团块时，加入稀释剂３毫升，稍停一分钟，再轻轻研磨至乳化，将稀释剂加完为止，即得１∶２０供试液。

三、阳性菌株对照试验

２．常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌４４１０２、沙门氏菌５００９４、绿脓杆菌１０１０４、金黄色葡萄球菌２６００３和破伤风杆菌６４０６７等。

４．作阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染供试品和环境。为此，加入阳性菌的操作可在另外无菌室或其他适宜的地方进行。

第二章  药品卫生检验法

细菌总数的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染的活菌数量。测定结果便于判明供试品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的药品原料、工具设备和工艺流程、操作者的卫生状况，是对供试品进行卫生学总评价的综合依据。

固体供试品，以无菌操作称取若干克，按下列方法之一进行稀释：

（２）将已称取的供试品连同１００毫升的稀释剂加入灭菌三角瓶或其他相应容器内，进行振荡，使成１∶１０的均匀供试液。

用１毫升灭菌吸管，吸取１∶１０供试液１毫升，沿管壁注入装有９毫升灭菌的稀释剂试管内，混匀即为１∶１００稀释液。

另用１毫升灭菌吸管１支，按高倍稀释至低倍稀释的顺序分别吸取各稀释度的液体１毫升，注入直径９厘米的平皿内，或在作上述１０倍递增稀释时，应稀释妥一稀释度，即可取１毫升稀释液注入平皿内。一般可根据对供试品污染情况的估计，从供试液起选择２—３个适宜稀释度进行测定，每个稀释度各用２—３个平皿。

为减少片状菌落的干扰，也可采用０．００１％ＴＴＣ琼脂，在无菌室开盖倒置或换灭菌的干燥陶瓦盖等方法使平板表面干燥后，再进行培养。

先用肉眼观察，点数菌落数（霉菌不包括在内），然后持５—１０倍放大镜检查有无遗漏。各平板菌落计数后，求出同一稀释度各平板生长的平均菌落数。如平板中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平板不宜计数。

一般的报告方法是选取同一稀释度平均菌落数在３０—３００之间的平板，作为菌落总数测定的范围。如每个稀释度使用两个平板，应采用两个平板的菌落平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，或两平板菌落数相差一倍以上，此稀释度不宜采用。如每个稀释度使用三个平板，应采用三个平板菌落数的平均数，其中有两个平板菌落数较接近，另一个平板相差在一倍以上，或有片状菌落生长时，则应采用前者平均数为该稀释度的菌落数，按下列规则乘其稀释倍数报告之。

（１）若只有一个稀释度，平均菌落数在３０—３００个之间时，乘以稀释倍数报告之（见表１例１）。

（３）若所有稀释度的平均菌落数均多于３００个，则应按稀释度最高的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表１例４）。

（５）若所有稀释度的平均菌落数均不在３０—３００之间，其中一个稀释度大于３００，而相邻的另一稀释度小于３０时，则以接近３０或３００的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表１例６）。

菌数的报告，菌数在１００以内时，按实有数报告之，大于１００时，采用左端前二位数字，在前两位数字之后的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用１０的指数来表示（见表１）。

二、霉菌总数测定法

１．供试品的测定：

２．酵母菌霉菌菌数报告：

一般眼科制剂的细菌、霉菌总数测定按上述方法进行并报告之。如抗生素或有抑菌作用的制剂，采用适宜的方法处理后，按常规方法进行。

三、大肠杆菌检验法

大肠杆菌检验程序。

      表２  肠杆菌科各菌属的生化特性鉴别表－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－            ｜    ｜    ｜爱  ｜    ｜亚  ｜枸  ｜克  ｜      肠  杆  菌  属    ｜    沙  雷  氏  菌  属  ｜    菌属    ｜艾  ｜志  ｜德  ｜沙  ｜利  ｜橼  ｜雷  ｜－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－｜            ｜希  ｜贺  ｜华  ｜门  ｜桑  ｜酸  ｜伯  ｜    ｜    ｜  哈夫尼亚  ｜      ｜    ｜    液化  ｜－－－－－－｜氏  ｜氏  ｜氏  ｜氏  ｜那  ｜杆  ｜氏  ｜阴沟｜产气｜－－－－－－｜粘  质｜红色｜－－－－－｜  生化特性  ｜菌  ｜菌  ｜菌  ｜菌  ｜菌  ｜菌  ｜菌  ｜    ｜    ｜37℃｜22-   ｜      ｜    ｜37℃｜22- ｜            ｜属  ｜属  ｜属  ｜属  ｜属  ｜属  ｜属  ｜    ｜    ｜    ｜25℃  ｜      ｜    ｜    ｜25℃｜－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜靛基质      ｜+   ｜-/+ ｜+   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-/+ ｜-   ｜-   ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-   ｜-   ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜甲基红      ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜-   ｜-   ｜-   ｜+/- ｜-     ｜-/+   ｜-/+ ｜+/- ｜-/+ ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜Ｖ－Ｐ反应  ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+/- ｜+     ｜+     ｜+   ｜-/+ ｜+/- ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜西蒙氏枸橼  ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜(+) ｜d     ｜+     ｜+   ｜+   ｜+   ｜酸盐        ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜/-  ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜硫化氢（三糖｜-   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+/- ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-   ｜-   ｜铁）        ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜ w  ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜ w    ｜-,  ｜    ｜    ｜尿素酶      ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜+   ｜+/- ｜-   ｜-   ｜-     ｜d     ｜+)w ｜d   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜氰化钾      ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜+     ｜-/+ ｜+   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜动力        ｜+/- ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜+     ｜+   ｜+   ｜+   ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜明胶(２２℃)｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜(+) ｜-   ｜-   ｜(+) ｜-/  ｜    ｜-     ｜+/    ｜+   ｜    ｜+   ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜/-  ｜(+) ｜    ｜      ｜(+)   ｜    ｜    ｜    ｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－赖氨酸脱羧  ｜d   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜-   ｜+   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+     ｜+     ｜+/  ｜+/- ｜+   ｜酶          ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜(+) ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜精氨酸双水  ｜d   ｜-/  ｜-   ｜(+) ｜+/  ｜d   ｜-   ｜+   ｜-   ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-   ｜-   ｜解酶        ｜    ｜(+) ｜    ｜/+  ｜(+) ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜鸟氨酸脱羧  ｜d   ｜d   ｜+   ｜+   ｜+   ｜d   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜+     ｜-   ｜+   ｜+   ｜酶          ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜苯丙氨酸脱  ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-   ｜    ｜氨酶        ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜丙二酸钠    ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜+   ｜d   ｜+   ｜+/- ｜+/- ｜+/- ｜d     ｜-     ｜+/- ｜-   ｜    ｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－葡萄糖产气  ｜+   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜+°/- ｜-/+ ｜+   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜乳糖        ｜+   ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜(+) ｜+   ｜+   ｜+   ｜-/  ｜-     ｜-     ｜+   ｜d   ｜(+) ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜/+  ｜    ｜    ｜    ｜(+) ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜蔗糖        ｜d   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜+   ｜+   ｜+   ｜d   ｜-/(+) ｜+     ｜+   ｜+   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜甘露醇      ｜+   ｜+/- ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜+     ｜+   ｜+   ｜+   ｜－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜卫矛醇      ｜d   ｜d   ｜-   ｜d   ｜-   ｜d   ｜-/+ ｜-/+ ｜-   ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜水杨甙      ｜d   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜+   ｜+/  ｜+   ｜d   ｜d     ｜+     ｜+   ｜+   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜(+) ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜侧金盏花醇  ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜-   ｜+/- ｜-/+ ｜+   ｜-   ｜-     ｜d     ｜+   ｜d   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜肌醇        ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜-   ｜-   ｜+   ｜d   ｜+   ｜-   ｜-     ｜d     ｜d   ｜+   ｜+   ｜－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜山梨醇      ｜+   ｜d   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜-   ｜-     ｜+     ｜-   ｜+   ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜阿拉伯糖    ｜+   ｜d   ｜-   ｜+/  ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜-     ｜+   ｜+   ｜+   ｜            ｜    ｜    ｜    ｜(+) ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜棉子糖      ｜d   ｜d   ｜-   ｜-   ｜-   ｜d   ｜+   ｜+   ｜+   ｜-   ｜-     ｜-     ｜+   ｜d   ｜+   ｜            ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜    ｜      ｜      ｜    ｜    ｜    ｜鼠李糖      ｜d   ｜d   ｜-   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+   ｜+     ｜-     ｜-   ｜-   ｜-   ｜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－            ｜  果胶杆菌属｜      形  杆  菌  属        ｜普罗菲登斯菌属    菌属    ｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜  生化特性  ｜37℃｜22-   ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜25℃  ｜普  通｜奇异｜摩根氏｜雷极氏｜产碱｜司徒氏－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜靛基质      ｜-/+ ｜-/+   ｜+     ｜-   ｜+     ｜+     ｜+   ｜+            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜甲基红      ｜-/+ ｜+/-   ｜+     ｜+   ｜+     ｜+     ｜+   ｜+            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜Ｖ－Ｐ反应  ｜-/+ ｜-/+   ｜-     ｜-/+ ｜-     ｜-     ｜-   ｜-            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜西蒙氏枸橼  ｜d   ｜+/(+) ｜d     ｜+/  ｜-     ｜+     ｜+   ｜+酸盐        ｜    ｜      ｜      ｜(+) ｜      ｜      ｜    ｜－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－硫化氢（三糖｜-   ｜-     ｜+     ｜+   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-铁）        ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜ w    ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜尿素酶      ｜d   ｜d     ｜+     ｜+/  ｜+     ｜+     ｜-   ｜-            ｜    ｜      ｜      ｜(+) ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜氯化钾      ｜+/- ｜+/-   ｜+     ｜+   ｜+     ｜+     ｜+   ｜+            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜动力        ｜+/- ｜+/-   ｜+     ｜+   ｜+/-   ｜+     ｜+   ｜+/-            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜明胶(２２℃)｜    ｜+/(+) ｜+     ｜+   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－赖氨酸脱羧  ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-酶          ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜精氨酸双水  ｜-   ｜-/(+) ｜-     ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-解酶        ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜鸟氨酸脱羧  ｜-   ｜-     ｜-     ｜+   ｜+     ｜-     ｜-   ｜-酶          ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜苯丙氨酸脱  ｜-   ｜-     ｜+     ｜+   ｜+     ｜+     ｜+   ｜+氨酶        ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜丙二酸钠    ｜-/+ ｜-/+   ｜-     ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－葡萄糖产气  ｜-/+ ｜d     ｜+°/- ｜+   ｜d     ｜-/+   ｜d   ｜-            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜乳糖        ｜d   ｜+/(+) ｜-     ｜-   ｜-     ｜-     ｜-   ｜-            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜蔗糖        ｜+/- ｜+     ｜+     ｜d   ｜-     ｜d     ｜d   ｜(+)            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜      ｜      ｜    ｜/+            ｜    ｜      ｜      ｜    ｜