作者：admin发布时间：2012-11-01 19:13浏览：
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一，醋酸白试验
用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟，本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色，醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好，但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性，假阳性变白迹象显得界限不清和不规则，美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见，
二，免疫组织学检查
常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法（即PAP），显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原，HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应，
三，组织化学检查
取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色，如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合，在过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色，此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助，
四，病理检查
主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样，刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂，颇似癌变，但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚，其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成，此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡，中央有大而圆，深嗜碱性的核，通常真皮水肿，毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润，Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织，易与鳞状细胞相混，故须多次活检，若有缓慢发展之倾向， 则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌，
五，基因诊断
迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交，近年来发展的PCR方法具有特异，敏感，简便，快速等优点，为HPV检测开辟了新途径，
（一）标本的采集及处理
1．标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞，在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA，
2．标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/L Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇（24:1）各抽提2次；加1/10体积3mol/L NaAc（pH 5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA；加1体积乙醇洗涤1次；用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA)溶解DNA，37℃温育30min，
（二）PCR扩增
1． 引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L），每区含一系列开放读码框架（ORF），序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1，E6，E7和L1区均有保守序列，Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV 6，11，16，18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV，
Manos等设计的HPVL1通用引物
MY11：GCMCAGGGWCATAAYAATGG
MY09：CGTCCMARRGGAWACTGATC
表1
HPV型
MY11的第1个硷基位置
MY09的第1个硷基位置
PCR产物长度（bp）
6
6722
7170
448
11
6707
7155
448
16
6584
7035
451
18
6558
7012
454
33
6539
6987
448
M=A+C， R=A+G，W=A+T，Y= C+T
表2列述了Manos等设计的寡核苷酸探针，公用混合探针序列选自HPVL1区中另一保守序列，可与MY11和MY09引物产生的多种HPVL1 PCR扩增产物杂交：型特异探针只与相应HPV型有互补序列，用于检出的HPV分型，
表2 Manos等设计的HPVL1 PCR产物探针.