【H 】G C L 2 -1 指导原则编号：
化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性
研究技术指导原则(第二稿)
二○○四年三月一日ഊ目录
一、概述 ………………………………………………………3
二、BA 和BE 基本概念及应用…………………………………4
三、BA 和BE 研究方法……………………………………… 6
四、BA 和BE 研究具体要求…………………………………… 8
（一）生物样本分析方法的建立和确证………………………8
1.常用分析方法 ……………………………………… ………… 8
2.方法学确证 ………………………………………………… 9
3.方法学质控 ……………………………………… …………12
4.分析数据的纪录与报告提交……………………………… …13
（二）实验设计与操作………………………………………14
1.交叉设计 ……………………………………… ………… 15
2.受试者的选择 ……………………………………………… 16
3.受试制剂和参比制剂 ……………………………………… 18
4.给药剂量 ………………………………………………… 18
5.取样 ……………………………………… ……………… 19
6.药代动力学参数计算………………………………………… 20
7.研究过程标准化 ……………………………………………20
（三）数据处理及统计分析………………………………… 21
1.数据表达 ……………………………………………………21
2.药代动力学参数 ……………………………………………21
1ഊ3.统计分析…………………………………………………22
4.群体生物等效性和个体生物等效性……………………24
（四）结果的评价 …………………………………………25
（五）提交临床报告内容…………………………………………26
五、特殊制剂……………………………………… ……… … …27
1.口服缓控释制剂……………………………………26
2.特殊活性成分制剂……………………………………29
3.复方制剂 ……………………………………… …………29
六、结语 ………………………………………………………30
[名词解释]……………………………………… ……………30
[参考文献 ]……………………………………………………32
[附录]……………………………………… …………………33
[起草说明 ]……………………………………………………33
2ഊ一、概述
药物制剂要产生最佳疗效，其活性药物成分应当在预期的时间
段内释放并被吸收到作用部位，在作用部位达到预期的有效浓度。因
为大多数药物是进入全身血液循环后产生全身治疗效果的，作用部位
的浓度和血液中药物浓度存在一定的比例关系，因此可以通过测定血
液循环中的药物浓度来获得反映药物体内的吸收速度和程度的主要
药代动力学参数，间接预测药物制剂的临床治疗效果，以评价制剂的
质量。允许这种预测的前提是制剂中活性成分进入体内的行为是一致
并且可重现的。
生物利用度（Bioavailability BA ）是反映药物活性成分吸收
进入体内的程度和速度的指标（参见二.1 ）。因为过去出现的一些由
于制剂生物利用度不同而导致的不良事件，人们认识到确有必要对制
剂中活性成分生物利用度的一致性或可重现性进行验证，尤其是在含
有相同活性成分的仿制药品要替代它的原创药进入临床使用的时候。
如前所述，药物浓度和治疗效果相关，假设在同一受试者，相同的血
药浓度-时间曲线意味着在作用部位能产生相同的药物浓度，产生相
同的疗效，因此可以药代动力学参数作为替代的终点指标来建立等效
性，即生物等效性（Bioequivalence BE ）。
BA 和BE 研究已经成为评价制剂质量的重要手段。由于我国目前
药品的开发仍是以仿制为主，创新为辅，创新制剂多为在原剂型上的
改良，因此生物利用度和生物等效性研究成为其研究开发中的重要内
容。本指导原则重点阐述了BA 和BE 研究的相关概念，何时该进行
3ഊBA 和BE 研究以及如何进行BA 和BE 研究的设计、操作和评价，以期
引导国内进行科学规范的BA 和BE 研究，促进我国药品制剂质量的提
高。
本制导原则主要针对口服化学药品制剂的BA 和BE 研究进行阐
述，也适用于其他需要吸收起全身作用的化学药品制剂。因为在具体
应用过程中有可能面临多种具体情况，对于一些特殊问题，仍应遵循
具体问题具体分析的原则。
二、BA 和BE 基本概念及应用
1.生物利用度（Bioavailability BA ）：是指药物或药物活性成分
从制剂释放吸收进入全身循环的程度和速度。一般分为绝对生物利用
度和相对生物利用度。绝对生物利用度是以静脉制剂为参比制剂获得
的药物吸收进入体内循环的相对量（因为静脉制剂生物利用度通常被
认为是100%的）；相对生物利用度则是以其它非静脉途径给药的制剂
为参比制剂，如片剂和口服溶液的比较。
2.生物等效性（Bioequivalence BE ）：是指药学等效制剂或可替
换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分吸收程度和速
度的差异无统计意义。通常意义的BE 研究是指用BA 研究方法以药代动
力学参数为终点指标根据预先确定的等效标准和限度进行的比较研
究。在药代方法确实不可行时,也可以考虑以临床试验、药效学指标、
体外试验指标进行比较，但需充分证实其方法具有科学性和可行性。
了解以下几个概念将有助于理解BA 和BE ：
原创药（Innovator Product ）：是指已经经过全面的药学、药理学
4ഊ和毒理学以及临床研究数据证实其安全有效性并首次被批准上市的
产品。
药学等效性(Pharmaceutical equivalence)：如果两药品含有相同量
的同一活性成分，具有相同的剂型，符合同样的或可比较的质量标准，
则可以认为他们是药学等效的。药学等效制剂不一定意味着生物等
效，因为辅料的不同或生产工艺差异可能会导致药物溶出或吸收加快
或减慢。
治疗等效性(Therapeutic equivalence)：如果两制剂含有相同活性成
分，并且临床上显示具有相同的安全性和有效性，可以认为两药具有
治疗等效性。如果两制剂中所用辅料本身并不会导致有效性和安全性
问题，生物等效性研究是证实两制剂治疗等效性最合适的办法。如果
药物吸收速度与临床疗效无关,吸收程度相同但吸收速度不同的药物
也可能达到治疗等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化学形式
不同（如某一化合物的盐、酯等）或剂型不同（如片剂和胶囊剂）的
药物也可能治疗等效；
基本相同药物（Essentially similar product ）：如果两个制剂具有相
同数量且符合同一质量标准的活性成分，具有相同剂型，并且经过证
明具有生物等效性,则两个制剂可以认为是基本相同药物。从广义上
讲，这一概念也应适用于含同一活性成分的不同的剂型，如片剂和胶
囊剂。与原创药基本相同药物是可以替代原创药使用的。
BA 和BE 均是评价制剂质量的重要指标，BA 强调反映药物活性成
分到达体内循环的过程，是新药研究过程中选择最佳给药途径和确定
5ഊ用药方案(如给药剂量和给药间隔)的重要依据之一。BE 则重点在于
以预先确定的等效标准和限度进行的比较，是保证含同一药物活性成
分的不同制剂质量一致性的依据，是判断后研发产品是否可替代已上
市药品使用的依据。
BA 和BE 研究目的不同，因而在药品研发的不同阶段有不同作用。
如在新药研究阶段，为了确定新药处方、工艺合理性，通常需要比较
改变上述因素后药剂是否能达到预期的生物利用度；开发了新剂型，
要对拟上市剂型进行生物利用度研究以确定剂型的合理性，要通过与
原剂型比较的BA 或BE 研究来确定新剂型的给药剂量；在临床试验过
程中，可能要通过BE 研究来验证同一药物的不同时期产品的前后一
致性，如：早期和晚期的临床试验用药品，临床试验用药品（尤其是
用于确定剂量的试验药）和拟上市药品。
在仿制生产已有上市药品时，由于不同厂家的处方工艺不同，可
能存在影响制剂生物利用度的因素，故此时可以通过体内生物等效性
研究来求证仿制产品与原创药是否具生物等效性，如等效则可替代原
创药使用。
新药或仿制药批准上市后，如处方组成成分、比例以及工艺等出
现变更时，研究者可以根据产品变化的程度来确定进行进一步的人体
BA 或BE 研究，求证变更后和变更前产品是否具有相同的安全性和有
效性。
三、研究方法
如前所述，BE 研究是在试验制剂和参比制剂生物利用度比较基础
6ഊ上建立等效性，BA 研究本身也是比较性研究，两者的研究方法与步
骤基本一致，只是研究目的的不同，而导致在某些设计和评价上有一
些不同，故在这部分主要阐述BE 研究方法，该方法同样适合于BA 研
究，建议研究者根据产品研究目的来进行适当调整。
目前推荐的生物等效性研究的方法包括体外和体内的方法，按方
法的优先考虑程度从高到低排列：药代动力学研究方法、药效动力学
研究方法、临床试验方法、体外研究方法。具体如下：
药代动力学研究
即采用人体生物利用度比较研究的方法，如前所述，因为BA 定
义表达为有效成分到达全身循环的吸收程度和速度，通过测量可获得
的不同时间点的生物样本（如全血、血浆、血清或尿液）中药物含量，
获得药物浓度-时间曲线（Concentration-Time curve,C-T 曲线）图，并
经过适当的数据处理，计算出与吸收程度和速度有关的药代动力学参
数如曲线下面积（AUC ），达峰浓度（Cmax ）、达峰时间（Tmax ）等，
来反映药物从制剂中释放吸收到体循环中的动态过程，再通过统计比
较判断两制剂是否在治疗上等效。
药效动力学研究
在无可行的药代动力学研究方法建立生物等效性研究时（如无灵
敏的血药浓度检测方法、浓度和效应之间不存在线性相关），可以考
虑用明确的可分级定量的客观的临床药效学指标通过药效-时间曲线
（Effect-Time curve ）比较来建立等效性，使用该方法同样应严格遵
守临床试验相关管理规范，并经过充分方法学确证。
7ഊ临床试验
当无适宜的药物浓度检测方法，也缺乏明确的可定量分级的客观
的临床药效学指标时，也可以通过对照的临床比较试验，以综合的疗
效终点指标来验证两制剂的等效性。然而，作为生物等效研究方法，
对照的临床试验可能因为样本量有限和检测指标不灵敏而缺乏效率，
而扩大样本量，又将带来经济上的耗费，故应尽量采用前述方法。
体外研究
一般不提倡用体外的方法来建立生物等效性，因为体外不能完全
代替体内行为，但在某些情况下，如能提供充分依据，也可以采用体
外的方法来进行生物等效研究。FDA 规定，根据生物药剂学分类证
明属于高溶解度，高渗透性，快速溶出的口服制剂可以采用体外溶出
度比较研究的方法验证生物等效，因为该类药物的溶出、吸收已经不
是药物进入体内的限速步骤。对于难溶性但高渗透性的药物，如已建
立良好的体内外相关关系，也可用体外溶出的研究来替代体内研究。
但这仅限用于原发厂产品上市后变更的情况，具体研究和评价方法可
参见相关文献，在此不作详细阐述。
四、BA 和BE 研究具体要求
上述方法中，以药代动力学参数为终点指标的研究方法是目前普
遍采用的生物等效性研究方法，一个完整的生物等效性研究包括生物
样本分析、实验设计、统计分析、结果评价四个方面内容。
（一）生物样本分析方法的建立和确证
生物样品一般来自全血、血清、血浆、尿液或其他组织，具有取
8ഊ样量少、药物浓度低、内源性物质的干扰多（如无机盐、蛋白质、脂
质、代谢物以及可能同服的其他药物）以及个体的差异大等特点，因
此必须根据待测物的结构、生物介质和预期的浓度范围，建立适宜的
生物样品定量分析方法，并对方法进行确证。
1.常用分析方法
目前常用的几种分析方法有：
（1 ）色谱法：气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、色谱－
质谱联用法（LC －MS 、LC-MS-MS 、GC-MS 、GC-MS-MS ）等，可用于大
多数药物的检测；（2 ）免疫学方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、
荧光免疫分析法等，多用于蛋白质多肽类物质检测；（3 ）微生物学方
法，可用于抗生素药物的测定。
生物样本分析方法的选择宜尽量选择可行的灵敏度高的方法。
2.方法学确证（Method Validation ）
建立可靠的和可重现的定量分析方法是进行生物等效性研究的关
键之一。为了保证分析方法可靠，必须对方法充分验证，一般应进行
以下几方面的考察：
2.1 ．特异性(Specificity )
特异性是指样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确、
专一地测定分析物的能力。必须提供证明所测定物质是受试药品的原
形药物或特定活性代谢物，生物样品所含内源性物质和相应代谢物、
降解产物不得干扰对样品的测定，如果有几个分析物，应保证每一个
分析物都不被干扰。应确定保证分析方法特异性的最佳检测条件。对
9ഊ于色谱法至少要考察6 个不同来源空白生物样品色谱图、空白生物样
品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图反映
分析方法的特异性。对于质谱法（LC －MS 、LC-MS-MS ）则应注意考察
分析过程中的介质效应。
2.2.标准曲线和定量范围（Calibration Curve ）
标准曲线反映了所测定物质浓度与仪器响应值之间的关系，一般
用回归分析方法（如用加权最小二乘法）所得的回归方程来评价。应
提供标准曲线的线性方程和相关系数，说明其线性相关程度。标准曲
线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验
要求的精密度和准确度。
配制标准样品应使用与待测样品相同生物介质，不同生物样品应
配制标准样品制备各自的标准曲线，用于建立标准曲线的标准浓度个
数取决于分析物可能的浓度范围和分析物/响应值关系的性质。必须
至少用6 个浓度建立标准曲线，对于非线性相关可能需要更多浓度
点。定量范围要能覆盖全部待测的生物样品浓度范围，不得用定量范
围外推的方法求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随行空白生物
样品，但计算时不包括该点，仅用于评价干扰。标准曲线各浓度点的
实测值与标示值之间的偏差*在可接受的范围之内时，可判定标准曲
线合格。可接受范围一般规定为最低浓度点的偏差在±20%以内，其
余浓度点的偏差在±15%以内。只有合格的标准曲线才能对临床待测
样品进行定量计算。当线性范围较宽的时候，推荐采用加权的方法对
* ：偏差=[（实测值－标示值）/标示值]X100%
10ഊ标准曲线进行计算，以使低浓度点计算得比较准确。
2.3.定量下限（Lower Limit of quantitation ，LLOQ ）
定量下限是标准曲线上的最低浓度点，表示测定样品中符合准确
度和精密度要求的最低药物浓度。LLOQ 应能满足测定3 ～5 个消除半
衰期时样品中的药物浓度或能检测出Cmax 的1 ／10 ～1 ／20 时的药物
浓度。其准确度应在真实浓度的80%～120%范围内，相对标准差(RSD)
应小于20%。应由至少5 个标准样品测试结果证明。
2 ．4.精密度与准确度(Prcision and Accuracy )
精密度是指在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一
系列测量值的分散程度。通常用质控样品的批内和批间RSD 来考察方
法的精确度。一般RSD 应小于15 ％，在LLOQ 附近RSD 应小于20 ％。
准确度是指在确定的分析条件下，测得的生物样品浓度与真实浓
度的接近程度(即质控样品的实测浓度与真实浓度的偏差)，重复测定
已知浓度分析物样品可获得准确度。一般应85 ％～115 ％范围内，在
LLOQ 附近应在80 ％～120 ％范围内。
一般要求选择高、中、低3 个浓度的质控样品同时进行方法的精
密度和准确度考察。低浓度选择在LLOQ 的3 倍以内，高浓度接近于
标准曲线的上限，中间选一个浓度。在测定批内精密度时，每一浓度
至少制备并测定5 个样品。为获得批间精密度应至少在不同天连续制
备并测定3 个分析批(Analytical run/Analytical batch)，至少45 个样品。
2.5.样品稳定性(Stability )
根据具体情况，对含药生物样品在室温、冰冻和冻融条件下以及
11ഊ不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存放条件和时间。
还应注意考察储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳
定性，以保证检测结果的准确性和重现性。
2.6.提取回收率
从生物样本基质中回收得到分析物质的响应值除以纯标准品产
生的响应值即为分析物的提取回收率。也可以说是将供试生物样品中
分析物提取出来供分析的比例。应考察高、中、低3 个浓度的提取回
收率，其结果应当一致、精密和可重现。
2.7.微生物学和免疫学方法确证
上述分析方法确证主要针对色谱法，很多参数和原则也适用于微
生物学或免疫学分析，但在方法确证中应考虑到它们的一些特殊之
处。微生物学或免疫学分析的标准曲线本质上是非线性的，所以应采
用比化学分析更多的浓度点来建立标准曲线。结果的准确度是关键的
因素，如果重复测定能够改善准确度，则应在方法确证和未知样品测
定中采用同样的步骤。
微生物学或免疫学分析方法确证实验应包括在几天内进行的6 个
分析批，每个分析批包括4 个浓度（LLOQ ，低、中、高浓度）的质控
双样本。
3 ．方法学质控
只有在生物样本分析方法确证完成之后才能开始测定未知样品。
在测定生物样品中的药物浓度时应进行质量控制，以保证所建立的方
法在实际应用中的可靠性。推荐由独立的人员配制不同浓度的质控样
12ഊ品对分析方法进行考核。
每个未知样品一般测定一次，必要时可进行复测。生物等效性试
验中，来自同一个体的生物样品最好在同一批中测定。每个分析批生
物样品测定时应建立新的标准曲线，并随行测定高、中、低三个浓度
的质控样品。每个浓度至少双样本，并应均匀分布在未知样品测试顺
序中。当一个分析批中未知样品数目较多时，应增加各浓度质控样品
数，使质控样品数大于未知样品总数的5%。质控样品测定结果的偏
差一般应小于15%，低浓度点偏差一般应小于20%，最多允许1/3 不
在同一浓度的质控样品结果超限。如质控样品测定结果不符合上述要
求，则该分析批样品测试结果作废。
浓度高于定量上限的样品，应采用相应的空白介质稀释后重新测
定。对于浓度低于定量下限的样品，在进行药代动力学分析时，在达
到Cmax 以前取样的样品应以零值计算，在达到Cmax 以后取样的样品应
以无法定量（Not detectable, ND ）计算，以减小零值对AUC 计算的影
响。
整个分析过程应当遵从预先制订的实验室SOP （Standard Operating
Procedures ）以及GLP(Good Laboratory Practice )原则。
4 ．分析数据的记录与报告提交
分析方法的有效性应通过实验证明。在分析报告中，应提交完成
这些实验工作的相关资料。建立一般性和特殊性标准操作规程、保存
完整的实验记录是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中
产生的数据和QC(Quality Control )样品测试结果应全部记录并妥善保
13ഊ存，并提交足够的可供评价的方法学建立和样品分析的数据。
至少应当提交的数据包括：
4.1.方法建立数据
分析方法的详细描述；仪器设备、分析条件；该方法所用对照品
（被测药物、代谢物、内标物）的纯度和来源；描述测定特异性、准
确度、精密度、回收率、定量限、标准曲线的实验并给出获得的主要
数据列表；列出批内批间精密度和准确度的详细结果；描述稳定性考
察及相关数据；根据具体情况提供代表性的色谱图或质谱图并加以说
明。
4.2.样品分析数据
样品处理和保存的情况；分析样品时标准曲线列表；用于计算结
果的回归方程；各分析批QC 样品测定结果综合列表并计算批内和批
间精密度、准确度；各分析批包括的未知样品浓度计算结果。
提交20%受试者样品测试的色谱图复印件，包括相应分析批的标
准曲线和QC 样品的色谱图复印件。
注明缺失样品的原因，重复测试的结果。对舍弃任何分析数据和
选择所报告的数据说明理由。
4.3 其他相关信息
项目编号、分析方法编号、分析方法类型、分析方法确证进行简
化的理由、以及相应的项目计划编号、标题等。
（二）实验设计与操作
14ഊ1.交叉设计
交叉设计是目前应用最多最广的方法，因为多数药物吸收和清除
在个体之间均存在很大变异，个体间的变异系数远远大于个体内变异
系数，因此生物等效性研究一般要求按自身交叉对照的方法设计。把
受试对象随机分为几组，按一定顺序处理，一组受试者先服用受试制
剂，后服用参比制剂；另一组受试者先服用参比制剂，后服用受试制
剂。两顺序间应有足够长的间隔时间，为清洗期（Wash-out Period ）。
这样，对每位受试者都连续接受两次或更多次的处理，相当于自身对
照，可以将制剂因素对药物吸收的影响与其他因素区分开来，减少了
不同试验周期和个体差异对试验结果的影响。
根据试验制剂数量不同分别采用2 ×2 交叉、3 ×3 交叉、4 ×4 交
叉设计。如果是两种制剂比较，双处理、双周期，两序列的交叉设计
是较好的选择。如试验包括3 个制剂（受试制剂2 个和参比制剂1 个）
时，宜采用3 制剂3 周期二重3 ×3 拉丁方试验设计。各周期间也应
有足够的清洗期。
设定清洗期是为了消除两制剂的互相干扰，避免上个周期内的处
理影响到随后一周期的处理中。一般不应短于7 个消除半衰期。如果
清除周期不够长，一个处理可能延续到下一个处理周期中去，这一携
带效应会使对于直接处理效应的估计更加困难甚至是不可能的。
但有些药物或其活性代谢物半衰期很长时则难以按此方法设计实
施，在此情况下可能需要按平行组设计进行。
而对于某些高变异性（Highly Variable ）的药物,可能应采用重复
15ഊ设计,对同一受试者两次接受同一制剂时可能存在的个体内差异进行
测定。
2.受试者的选择
2.1.受试者入选条件：
受试者的选择应当尽量使个体间差异减到最小，以便能检测出制
剂间的差异。试验方案中应明确入选和剔除条件。
一般情况应选择男性健康受试者。特殊作用的药品，则应根据具
体情况选择适当受试者。选择健康女性受试者应考虑到怀孕的可能
性，避免可能带来的偏差。如待测药物存在已知的不良反应，可能带
来安全性担忧，也可考虑选择患者作为受试者。
年龄:一般18 ～40 周岁，同一批受试者年龄不宜相差10 岁以上。
体重：正常受试者的体重一般不应低于50kg 。按体质指数(Body
Mass Index ,BMI )＝体重（kg ）／身高（m
2
）计算，一般在标准体
重范围内。同一批受试者体重（kg ）不宜悬殊过大，因为受试者服
用的药物剂量是相同的。
受试者应经过全面体检，身体健康，无心、肝、肾、消化道、神
经系统、精神异常及代谢异常等病史；体格检查示血压、心率、心电
图、呼吸状况、肝、肾功能和血象无异常，避免药物体内过程受到疾
病干扰。根据药物类别和安全性情况，还应在试验前、试验期间、试
验后进行特殊项目检查，如降糖药应检查血糖水平。
为避免其他药物干扰，试验前两周内及试验期间禁服任何其它药
物。实验期间禁烟、酒及含咖啡因的饮料，或某些可能影响代谢的果
16ഊ汁，以免干扰药物体内代谢。受试者最好是无烟、酒嗜好。如有吸烟
史，在讨论结果时应考虑可能的影响。还应注意有无吸毒史。
如已知药物存在遗传多态性导致代谢差异，应考虑由于慢代谢可
能出现的安全性问题。
2.2.受试者例数：
受试者例数应当符合统计学要求，对于目前的统计方法,18-24 例
可满足大多数药物对样本量的要求，但对某些变异性大的药物可能需
要适当增加例数。
一个临床试验的例数多少是由三个基本因素决定的：（1 ）显著性
水平：即α 值的大小，通常取0.05 或5%；（2 ）把握度：即1-β 值的
大小，β 是犯第Ⅱ类错误的概率，也就是把实际有效误判为无效的概
率，一般定为80%；（3 ）变异性（CV%）和差别（θ）：两药等效性检
验中检测指标的变异性和差别越大所需例数越多。最理想的设计是采
用最少的受试者例数来达到有80%把握度证明两种制剂是否生物等
效，否则，N 过大可能会带来其他非常重要差异的出现。因为在试验
前并不知道θ 和CV%，只能根据已有的参比制剂的上述参数来估算或
进行预试验。另外，当一个生物利用度试验完成后，可以根据θ 、CV%
和把握度等参数来求N 值，并与试验所选择例数进行对比，检验试验
所采用例数是否合适，尤其应避免出现例数过少情况，得出假阴性的
错误，即实为两制剂等效却误判为不等效。
2.3.受试者分组：必须采用随机方法分组，各组间应具有可比性。两
组例数最好相等,这时可比性最好,因此一般受试者例数为偶数.
17ഊ2.4.伦理学要求：药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验属临床
试验范畴，故须具备我国药品临床试验质量管理规范（GCP ）要求的
各项必要条件，按规范要求进行试验。须提供伦理委员会的批准书，
受试者签署知情同意书。
3.受试制剂和参比制剂(Test and Reference product ,T and R )
参比制剂的质量直接影响生物等效性试验结果的可靠性，参比制
剂的安全有效性应合格，一般应选择国内已经批准上市相同剂型药物
中的原创药，在无法获得原创药时，也可选用上市主导产品作为参比
制剂。但须提供相关质量证明（如含量、溶出度等检查结果）及选择
理由。若为完成特定研究目的，可选用相同药物的其它药剂学性质相
近的上市剂型作为参比制剂，这类参比制剂亦应该是已上市的且质量
合格的产品。
对于受试制剂，应为符合临床应用质量标准的放大产品。应提供
该制剂的体外溶出度、稳定性、含量或效价测定、批间一致性报告等，
供试验单位参考。个别药物尚需提供多晶型及光学异构体的资料。
参比制剂和受试制剂均应注明研制单位、批号、规格、保存条件、
有效期。参比制剂和受试制剂含量差别不能超过5%。
试验结束后受试制剂和参比制剂应保留足够长时间直到产品批准
上市以备查。
4.给药剂量
进行药物制剂生物利用度和生物等效性研究时，给药剂量一般应
与临床单次用药剂量一致，有时为了达到检测要求,也可以加倍服药
18ഊ剂量.但为安全考虑，一般不得超过临床推荐常用的单次最大剂量。
受试制剂和参比制剂最好应用相等剂量，需要使用不相等剂量时，应
说明理由并提供所用剂量范围内的线性药代动力学特征依据，结果可
以剂量校正方式计算生物利用度。
一般情况下普通制剂仅进行单剂量给药研究即可,但在某些情况
下可能需要考虑进行多次给药研究，如：（1 ）受试药品单次服用后原
形药或活性代谢物浓度很低，难以用相应分析方法精密测定血药浓度
时；（2 ）受试药的生物利用度有较大个体差异；（3 ）药物吸收程度相
差不大，但吸收速度有较大差异；（4 ）缓控释制剂（参见五.2 部分）。
进行多次给药研究应按临床推荐的给药方案给药，连续3 次测定谷浓
度确定血药浓度达稳态后选择一个给药间隔取样进行测定，并据此计
算生物利用度。
5 ．取样
取样点的设计对保证试验结果可靠性及药代动力学参数计算的合
理性，均有十分重要的意义。通常应有预试验或参考国内外的药代文
献，为合理设计采样点提供依据。应用血药浓度测定法时，一般应兼
顾到吸收相、平衡相和消除相。在血药浓度一时间曲线各时相及预计
达峰时间前后应有足够采样点，使血药浓度曲线能全面反应药物在体
内处置的全过程。服药前应先取空白血样。在吸收分布相部分至少取
2-3 个点，平衡相至少需要3 个点，消除相取6 个或6 个以上点。采
样持续到受试药原形或其活性物3 ～5 个半衰期时，或持续采样至血
药浓度为Cmax 的1 ／10 ～1 ／20 以后,AUC0-t/AUC0-∞通常应当大于80%。
19ഊ对于长半衰期药物，应尽可能取样持续到足够比较整个吸收过程，因
为末端消除项对制剂吸收过程的评价影响不大。多次给药研究中，对
于一些已知生物利用度受昼夜节律影响的药物，可能则应该连续24
小时取样。
当受试药不能用血药浓度测定方法进行生物利用度检测时，若该
药原形或活性代谢物主要由尿排泄，可以考虑尿药法测定，以尿样中
药物的累积排泄量来反映药物摄入量。试验药品和试验方案应当符合
生物利用度测定要求。尿样的收集采用分段收集法,其采集频度、间
隔时间应满足估算受试药原形药或活性代谢物经尿的排泄程度。但该
方法不能反映药物吸收速度。
一些前体药物在体内迅速代谢无法测定生物样品中原形药物，或
者药物活性代谢物在药物疗效中发挥重要作用时，也可采用测定生物
样品中相应活性代谢物浓度的方法，进行生物利用度和生物等效性试
验。
6.药代动力学参数计算
一般用非房室数学模型分析方法来估算药代动力学参数，因为用
房室模型方法估算药代参数时，采用不同的方法或软件其值可能有较
大差异。研究者可根据具体情况选择使用，但所用软件必须符合统计
学要求并应在研究报告中注明所用软件。在生物等效性研究中，其主
要测量参数Cmax 和Tmax 均以实测值表示。AUC0 →t 以梯形法计算，故受
数据处理程序影响不大。
7.研究过程标准化
20ഊ整个研究过程应当标准化，以使得除制剂因素外，其他各种因素
导致的体内药物释放吸收差异减少到最小。受试者的饮食、活动都应
统一，包括试验前1 日和试验期内均禁止饮用酒类和咖啡类饮料，某
些可能影响药物代谢的果汁；试验前禁食过夜10 小时以上，于次日
早晨空腹服用受试制剂或参比制剂，用200-250ml 温开水送服；服药
2 小时后方可再饮水，4 小时后统一进标准餐。受试者服药后应避免
剧烈运动，亦不得长时间卧床，避免活动造成对胃肠道运动和局部血
流量的影响。
试验工作应在Ⅰ期临床试验观察室进行。受试者应得到医护人员
的监护。受试期间发生的任何不良反应，均应及时处理和记录，必要
时停止试验。
（三）数据处理及统计分析
1.数据表达
BA 和BE 研究必须提供所有受试者各个时间点试验药品和参比药
品的药物浓度测定数据、每一时间点的平均浓度（Mean ）及其标准差
（SD ）和相对标准差（RSD ），提供每个受试者的药-时曲线（C-T 曲
线）图和平均C-T 曲线图以及C-T 曲线各个时间点的标准差。
2.药代动力学参数
2.1.单次给药的BA 和BE 研究，提供所有受试者服用试验药品和参比药
品的AUC0 →t ，AUC0 →∞、Cmax 、Tmax 、T1/2 、 F 等参数及其平均值和标准差。
Cmax 和Tmax 均以实测值表示。AUC0 →t 以梯形法计算；AUC0 →∞按公式
计算：AUC0 →∞＝AUC0 →t ＋Ct/λ z （t 为最后一次可实测血药浓度的采样
21ഊ时间；Ct 为末次可测定样本药物浓度；λ z 系对数血药浓度-时间曲线
末端直线部份求得的末端消除速率常数，可用对数血药浓度-时间曲
线末端直线部分的斜率求得；t1/2 用公式t1/2 ＝0.693 ／λ z 计算。
以各个受试者受试制剂（T ）和参比制剂（R ）的AUC0 →t 或AUC0 →∞值
按下式分别计算其相对生物利用度（F ）值：
当受试制剂和参比制剂剂量相同时：F ＝AUCT ／AUCR ×100 ％
受试制剂和参比制剂剂量不同时，若受试药物具备线性药代动力
学特征，可按下式以剂量予以校正：F ＝[AUCT ×DR ／AUCR ×DT ]×100
％（AUCT 、AUCR 分别为T 和R 的AUC ；DR.DT 分别为T 和R 的剂量）
生物利用度评价以AUC0 →t 为主，并参考AUC0 →∞。
2.2.对于多次给药的 BA 和BE 研究，提供试验药品和参比药品的三次
谷浓度数据（Cmin ），稳态下的AUCss Cmax 、Tmax 、T1/2 和 F 等参数。
当受试制剂与参比制剂剂量相等时，F 值按下式计算：
F ＝AUCss T ／AUCss R ×100 ％（式中AUCss T 和AUCss R 分别为T 和R 稳态
条件下的AUC ）
3.统计分析
3.1.对数转换
评价BE 的药代动力学参数AUC 和Cmax 在进行等效性检验前必须
作以10 为底的对数转换或自然对数转换。方差分析的前提条件是实
验数据服从或近似服从正态分布。当数据有偏倚时经对数转换可校正
其对称性。此外,统计中数据对比宜用比值法而不用差值法,通过对数
转换,可实现将均值之比置信区间转换为对数形式的均值之差的计
22ഊ算。
3.2.等效判断标准
当前普遍采用主要药代参数经对数转换后以多因素方差分析
（ANOVA ）进行显著性检验，然后用双单侧t 检验和计算90 ％可信区
间的统计分析方法来评价和判断药物间的生物等效性。
方差检验是显著性检验，设定的无效假设是两药无差异，检验方
式为是与否，在P<0.05 时认为两者差异有统计意义，但不一定不等
效；P>0.05 时认为两药差异无统计意义，但P>0.05 并不能认为两者
相等或相近。在生物利用度试验中，采用多因素方差分析（ANOVA ）
进行统计分析，以判断药物制剂间、个体间和周期间的差异。在生物
等效性实验中，方差分析可提示误差来源，为双单侧t 检验计算提供
了误差值（MSE ）。
双向单侧t 检验及（1 －2 α）%置信区间法是目前生物等效检验的
唯一标准。双向单侧t 检验是等效性检验，设定的无效假设是两药不
等效，供试验药在参比药一定范围之外，在P<0.05 时说明供试药没
有超过规定的参比药的高限和低限，拒绝无效假设，可认为两药等效。
（1 －2 α）%置信区间是双向单侧t 检验另一种表达方式。其基本原
理是在高、低2 个方向对受试制剂的参数均值与高低界值之间的差异
分别作单侧t 检验，若受试制剂均数在高方向没有大于等于参比制剂
均数的120 ％（数据进行对数转换时取125 ％）（P ＜0.05 ），且在低方
向也没有小于等于参比制剂均数的80 ％（P ＜0.05 ），即在两个方向
的单侧t 检验，都能以95 ％的置信度确认没有超出规定范围，则可
23ഊ认为受试制剂与参比制剂生物等效。
等效判断标准，根据临床经验人为确定，一般规定，经对数转换
后的受试制剂的AUC 在参比制剂的80 ％-125 ％范围，受试制剂的
Cmax 在参比制剂的70 ％-143 ％范围 。根据双单侧检验的统计量，同
时求得（1 －2α ）%置信区间，如在规定范围内，即可有1 －2α 的概
率判断两药生物等效。
如有必要时，应对Tmax 经非参数法检验，如无差异，可以认定受
试制剂与参比制剂生物等效。
4.群体生物等效性和个体生物等效性
目前均采用平均生物等效性（Average Bioequivalence ,ABE ）评价
方法，药物生物等效性的统计推断是以受试药和参比药生物利用度参
数平均值为考察指标的,从他们的样本均数推断总体均数是否等效。
平均生物等效性只考虑参数平均值,未考虑变异及分布,不能保证个
体间生物利用度相近,对低变异和高变异药物设置的生物等效性标准
一样。因此也有提出群体等效性（Population Bioequivalence, PBE ）和
个体生物等效性（Individual Bioequivalence,IBE ）的概念。
等效性研究用途是区别以下两种临床情况：可处方性
（prescribability ）和可互换性（switchability ）。可处方性是指医生首
次开处方给病人时，对该药品一般的性能特征较为清楚，该药已经经
过相关临床研究（包括生物等效性研究）验证了它的有效性和安全性。
可互换性是指在治疗过程中，医生要让某一病人从一种药转用另一种
药治疗的情况，此时医生可以肯定新用药品的安全性和有效性和被替
24ഊ换药是可比拟的。目前通常执行平均生物等效性研究可以证实药物可
处方性，但按其等效标准达到生物等效的药品用于某个患者时可能出
现治疗不等效，而个体等效性研究则强调了对于每个患者用药的可互
换性，减少了由于个体差异带来的风险。
因为目前对群体生物等效性和个体生物等效性经验有限，在此
不作详述 ，建议参照相关文献进行实验设计和统计分析以及评价。
（四）结果的评价
生物等效性是指一种药物的不同制剂在相同的实验条件下，给予
相同剂量，其吸收程度和吸收速度没有明显差异。故对受试制剂与参
比制剂的生物等效性评价，应从药物吸收程度和吸收速度两方面进
行，评价多采用反应这两方面的3 个药代动力学参数即AUC 、 Cmax 和
Tmax 是否符合前述等效标准。AUC 反映药物进入体循环的药物的量，
反映一定浓度和时间下的累积暴露量，Cmax 和Tmax 则反映吸收速度。
目前比较肯定AUC 对药物吸收程度的衡量作用,而Cmax 、Tmax 依
赖取样时间的安排,用他们衡量吸收速率有时是不够敏感和恰当的。
不适合用于具有多峰现象的制剂及样本变异大的实验。在评价时，若
出现某些不等效特殊情况，需具体问题加以具体分析。
对于AUC ，一般要求90 ％可信区间在80 ％－125 ％范围内。对于
治疗窗窄的药物，这个范围可能应适当缩小，而在少数情况下，如果
经临床证实合理的情况下，也可以适当放宽范围。对Cmax 也是如此。
而对于Tmax ，仅仅在其释放快慢与临床疗效和安全性密切相关时才
需要统计评价，其等效范围可根据临床要求来确定。
25ഊ对于出现试验制剂生物利用度比大大高于参比制剂的情况，即所
谓超生物利用度（Suprabioavailability ），可以考虑两种情况：1 ）.参
比制剂是否本身即为生物利用度低的产品，因而导致试验药相对生物
利用度提高；2 ）.参比制剂质量符合要求，试验药确实超生物利用度，
可以降低剂量进一步进行相对生物利用度研究，摸索出等效的给药剂
量。如不改变剂量，该剂量应有临床研究数据的支持。
结果的评价应结合研究目的出发，进行生物等效性评价的目的是
保证临床用药的可互换性，进行相对生物利用度研究，则主要分析获
得的相对生物利用度数值进一步确定新剂型的临床使用剂量，并非一
定要求等效。
（五）提交临床报告内容
为了满足评价的需求，一份生物等效性研究临床报告内容至少应
包括以下内容（1 ）实验目的；（2 ）生物样本分析方法的建立和考察
的数据，提供必要的图谱；（3 ）详细的实验设计和操作方法，包括受
试者的资料、样本例数、参比制剂、给药剂量、服药方法和采样时间
安排；（4 ）原始测定未知样品浓度全部数据，每个受试者药代参数和
药时曲线；（5 ）采用的数据处理程序和统计分析方法以及详细统计过
程和结果；（6 ）服药后的临床不良反应观察结果，受试者中途退出和
脱落记录及原因；（7 ）生物利用度或生物等效性结果分析以及必要的
讨论；（8 ）参考文献。正文前应有简短摘要；正文末，应注明实验单
位、研究负责人、参加实验人员，并签名盖章，以示对研究结果负责。
五、特殊制剂
26ഊ以上BE 研究方法主要针对普通口服制剂，但某些剂型要求有其
特殊性，简述如下：
1.口服缓控释制剂
缓释、控释制剂因为采用了新技术改变了其体内释放吸收过程，
因此必须进行生物利用度研究或生物等效性试验以证实其缓控释特
征，但在实验设计和评价时与普通制剂都有不同。一般要求应在单次
给药和多次给药达稳态两种条件下进行，必要是还应研究食物对吸收
的影响。
1.1.单次给药试验旨在比较受试者于空腹状态下服用缓释、控释受试
制剂与参比制剂的吸收速度和吸收程度的生物等效性，确认受试制剂
的缓释、控释药代动力学特征。实验设计基本同普通制剂。