【目的要求】
1．掌握转化、转导、重组DNA、限制性核酸内切酶、PCR的概念，重组DNA技术基本操作步骤。
2．熟悉同源重组，接合作用，基因组DNA文库、cDNA文库概念，PCR的基本原来、反应体系。
3．了解特异位点重组，转座重组。
【教学内容】
第一节DNA的重组
1．同源重组：同源重组的关键步骤（Holliday中间体）。
2．细菌的基因转移与重组：接合作用，转化作用，转导作用。
3．特异位点重组：λ噬菌体DNA的整合，细菌的特异位点重组，免疫球蛋白基因的重排。
4．转座重组。
第二节重组DNA技术
1．重组DNA技术相关概念：重组DNA（DNA克隆、基因克隆），限制性核酸内切酶，目的基因，基因载体（质粒、噬菌体）。
2．重组DNA技术基本原理及操作步骤：
①目的基因的获取：化学合成法，基因组DNA文库，cDNA文库，聚合酶链反应。
②克隆载体的选择和构建。
③外源基因与载体的连接：粘性末端连接，平端连接，同聚物加尾连接，人工接头连接
④重组DNA导入受体菌：感受态细胞，方式——转化、转染和感染。
⑤重组体的筛选：直接筛选法（抗药性标志选择、标志补救、分子杂交），免疫学方法。
⑥克隆基因的表达：原核表达体系，真核表达体系。
3．重组DNA技术与医学的关系
【教学方法】课堂讲授、多媒体
【授课学时】4学时