酶联合吸附测定

 酶联合吸附测定介绍：
　　
　　酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。

酶联合吸附测定正常值：
　　
　　待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)<2.1，而且待检血清的OD值<0.4，则判为阴性。

酶联合吸附测定临床意义：
　　
　　异常结果：待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性。

　　需要检查人群：检测抗原抗体。

酶联合吸附测定注意事项：
　　
　　不适宜人群：无

　　检查前禁忌：准备好各种包装液，并配置好浓度。

　　检查时禁忌:1.严格控制影响标记效率的因素如温度、时间、pH、酶和抗体量等。

　　2.装层析柱时要使柱体均匀、柱面平整，无气泡、裂隙。

酶联合吸附测定检查过程：
　　
　　常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

　　1.间接ELISA

　　本法主要用于检测抗体。间接ELISA的操作程序如下。

　　(1) 材料

　　① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;

　　② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清.

　　③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。

　　(2) 方法步骤

　　① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

　　② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干

　　③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干

　　④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液

　　⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。

　　2.双抗体夹心ELISA

　　本法主要用于检测大分子抗原。

　　① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

　　② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

　　③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

　　④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液

　　⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。