循环免疫复合物的检测

根据免疫复合物的物理学、免疫学和生物学特性，已经设计出很多检测CIC的方法（表24-4），本章只述及常用的代表性方法。

　　表24-4 循环免疫复合物的常用检测方法

类别	原理	方法	敏感性	备注
物理法	分子大小	1.超速离心	－	适于研究
2.分子超滤		－	适于研究
3.凝胶过滤		30μg	适于研究
溶解度	1.PEG沉淀	20μg	粗定量,易推广
2.冷沉淀	－	定性,临床应用
补体法	固定补体,结合C1q	抗补体试验	0.1μg	常用,特异性差
1.C1q凝胶沉淀试验		100μg	定性,不易普及
2.C1q偏离试验		4μg	不易普及
3.液相法		10μg	不易普及
4.固相法		1μg	不易普及
胶固素	胶固素结合试验	3μg	敏感,稳定
抗Ig法	结合RF	1.RF凝胶沉淀试验	100G	定性,不敏感
2.mRF固相抑制试验		1～20μg	不易普及
3.PRF凝集抑制试验		1～10μg	不易普及
结合Ig	抗抗体法	2～3μg	不易普及
细胞法	Fc受体	1.血小板凝集试验	1～4μg	需新鲜制备
2.ADCC抑制试验		5～10μg	细胞活性质控难
3.Mφ吞噬抑制试验		0.03μg	细胞活性质控难
补体受体	1.Raji细胞法	6μg	需维持细胞株
2.花环抑制试验	10μg	影响因素多

　　（一）物理测定法

　　1．聚乙二醇法聚乙二醇（PEG）是乙二醇聚合而成的无电荷形多糖分子，分子量变化范围较大，常用的分子量是6000。用3％～4％浓度的PEG可以选择性地将大分子免疫复合物沉淀下来，其作用机制尚不甚清楚。将PEG溶液与待检血清混合，置4℃冰箱过夜后离心，将沉淀物用PEG溶液充分洗涤，重新溶解于0.01mol/L的NaOH中，在波长280nm下测量溶液的吸光度；也可利用散射比浊法直接测定PEG沉淀的免疫复合物；以不同浓度的热聚合IgG作为参考标准来计算CIC的含量。

　　聚乙二醇法简单易行，可在临床工作中推广。但此法易受多种大分子蛋白和温度的干扰，特异性稍差。PEG法还特别适用于沉淀获得CIC，再进行解离分析其中的抗原与抗体。

　　2．冷球蛋白测定在某些病理情况下，血清中的免疫复合物具有可逆性冷沉淀的特性，于4℃冰箱中放置1～3天可自发地沉淀下来（参见第二十六章）；此种情况多见于冷球蛋白血症，所涉及的抗原包括自身的IgG、IgM、核苷酸、肿瘤相关抗原、肾小管上皮、甲状腺球蛋白、红细胞基质等，还有外源性抗原如乙肝病毒、EB病毒、巨细胞病毒、牛白蛋白和马蛋白等。

　　（二）补体相关测定法

　　IgG和IgM类抗体与抗原结合后，重链CH2区的补体结合点暴露，可以固定C1q并激活补体的系列反应，这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。

　　1．C1q结合试验将待检血清先行加热56℃30min，以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q，空出补体结合点。CIC与C1q的结合可用多种方法进行检测，常用的有以下3种。

　　（1）液相法：先将同位素标记的C1q与灭活过的血清标本混合作用，再加入0.5％（终浓度）的PEG将结合了C1q的CIC沉淀下来，通过检测沉淀物中的放射活性来计算CIC的含量。

　　（2）固相法：先将C1q吸附于固相载体表面，加入待检血清使CIC与C1q结合，再加入同位标记的或酶标记的抗人IgG或SPA，最后检测其放射活性或酶活性。

　　（3）C1q偏离试验：先将同位素标记的C1q与灭活的血清标本混合，再加抗体致敏的绵羊红细胞，温育后离心，检测红细胞上的放射活性。红细胞的放射活性与免疫复合物的量呈负相关。

　　2．补体试验本法的原理类似补体结合试验。将一定量的补体（多为混合豚鼠血清）与灭活的待检血清混合温育，反应后加入致敏绵羊红细胞。如出现溶血表示血清中没有CIC存在；不溶血说明标本中有CIC存在。将血清标本做不同稀释，并与已知的热聚合IgG作对照，可以计算出CIC的含量。本方法的灵敏度较高，且易于在一般实验室开展，不足之处是特异性较差。

　　3．胶固素结合试验胶固素（conglutinin）是牛血清中的一种正常蛋白，能与C3d特异性结合；体内与补体结合的CIC都带有C3d，因此胶固素可与CIC结合。用一定量的胶固素包被塑料管，往管中加入稀释的血清标本，温育后再加入同位素标记或酶标记的抗人IgG抗体，最后检测各管的放射活性或酶活性，计算CIC的含量。

　　胶固素性质稳定、容易保存、来源方便、价格便宜，检测方法也不复杂，便于推广。本法的不足是只能检出已结合补体的CIC，但不论何种激活途径都一样检出，并可用作CIC分离。