半抗原免疫原的制备的连接方法

半抗原与载体连接要掌握3个基本条件：带游离氨基或游离羧基以及二种基团皆有的半抗原，如多肽激素类（脑啡肽、胃泌素、ACTH、前列腺素等），它们有游离的氨基或羧基。羧基可用混合酸酐法和碳化二亚胺法与载体氨基形成稳定的肽键。同样，带氨基的半抗原则可与载体羧基缩合。亦可用双功能试剂如戊二醛、甲苯2，4-二异酸盐与载体氨基连接。脂肪胺可用碳化二亚胺缩合剂或对硝基苯酰氯反应，把脂肪胺变为对硝基苯酰胺，通过加氢还原为氨基苯酰衍生物，再用重氮化反应。②带有羟基、酮基、醛基的半抗原，如醇、酚、糖、多糖、核苷以及甾族激素等，它们都不能直接与载体连接，需要用化学方法在半抗原上引起羧基后才能与载体连接。③芳香族半抗原由于环上带有羧基，它邻位上的氢很活泼，极易取代。

　　半抗原和载体连接的方法在一般实验室皆可完成，但反应条件应严格要求，以防半抗原失活或载体严重变性（一般变性并不妨碍）。

　　1．碳化二亚胺法碳化二亚胺是一种化学性质非常活泼的双功能试剂，常用的水溶性碳化二亚胺化学名为1-乙基-3-（3-二甲氨基）-碳化二亚胺盐酸盐。它可与半抗原的羧基、也可与其氨基结合，反应如下：+

　　此连接方法十分简便，只需将载体蛋白质和抗原按一定比例混合在适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1～2h，置室温24h，再经透析即可。

　　2．戊二醛法戊二醛也是常用的双功能交联剂，它借两端的醛基与载体和半抗原的氨基以共价键连接，其反应如下：

　　蛋白质-NH2+半抗原-NH2+COH-(CH2)3-COH→蛋白质-N=CH-(CH2)3-CH=N-半抗原

　　3．氯甲酸异丁酯法该法又称为混合酸酐法，是利用半抗原上的羧基和载体蛋白上的氨基以肽链相连接，方法简便，多用于类固醇抗原的制备，其反应如下：