本要点适用于供治疗的体内诊断用的利用杂交瘤技术制备的单克隆、抗体，适用于在人体内应用的利用重复DNA技术制备的基因工程抗体
一、杂交瘤技术制备的单克隆抗体
（一）杂交瘤细胞
1、亲本细胞
（1）骨髓瘤细胞
SP2/0或其他适宜的骨髓瘤细胞系。应为不合成或不分泌免疫球蛋白链型，具有符合骨髓瘤细胞的染色体特征，并有明确的来源历史及符合要求的保存条件。
（2）免疫亲代细胞
经抗原免疫的鼠脾B淋巴细胞或外周血B淋巴细胞。
应有明确的免疫原来源、性质及动物种系，免疫原详细的制备过程。
适宜的免疫方案及免疫淋巴细胞制备的方法。
2、细胞融合与克隆化
采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。
3、杂交瘤细胞检定
（1）抗体分泌稳定性
连续克隆化后抗体阳性率达100%，经体外连续传代3个月以上和反复冻存、复苏，细胞系能保持稳定分泌特异性抗体。
（2）细胞核学特征
检查细胞分裂中期染色体，应符合杂交瘤细胞特征。
4、鼠源病毒检查
按附录要求检测鼠源病毒。
5、支原体检查
按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
6、无菌试验
按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。
（二）单克隆抗体的检定
1、免疫球蛋白类及亚类
用免疫双扩散法或其他适宜的方法测定。
2、亲和力
用可靠、准确的方法测定单克隆抗体（以下简称为单抗）的亲和常数或相对亲和力。一般情况下，对于免疫原为可溶性的单抗，测其亲和常数，对于免疫原为颗粒性抗原的单抗，测其相对亲和力。
3、特异性
测定单抗对靶抗原的特异性；对多株单抗识别的抗原决定簇进行相关性分析。
4、交叉反应
按附录要求。
免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的各种正常脏器组织测定。来源于肿瘤相关抗原的单抗应进行与各种肿瘤组织的交叉反应试验。
5、效价测定
用适宜方法测定。
（三）其他原材料
1、细胞培养用小牛血清
支原体检测应为阴性。经小量试验适于杂交瘤细胞生长。
2、培养液
应有培养液来源，质量指标。
3、化学试剂
规格应达到分析纯以上。
二、基因工程抗体
参考《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和本指导原则中的有关要求进行。
三、细胞库的建立
应分别建立原始细胞库、主细胞库、工作细胞库的三级管理细胞库，一般情况下主细胞库来自原始细胞库、工作细胞库来自主细胞库。各级细胞库应有详细的制备过程、检定情况及管理规定等。
四、单抗生产
包括用小鼠腹水法和细胞培养法制备。
（一）小鼠腹水法
1、小鼠
制备腹水必需使用合格的SPF级BACB/C小鼠或BACB/C和瑞士小鼠杂交子一代。
2、动物实验设施
动物实验设施应有相关部门颁发的二级以上合格证。
3、腹水制备
取适量扩增培养的杂交瘤细胞注射小鼠腹腔制备腹水，小鼠可以预先用液体石蜡或降植烷等处理。
（二）细胞培养法
可以采用发酵罐培养，亦可用细胞培养瓶培养收集上清液制备单克隆抗体。培养基用无牛血清或低牛血清培养基，不能用-内酰胺类抗生素。
（三）抗体纯化
可采用盐析法、分子筛层析、离子交换亲和层析等适宜的方法。
1、尽可能选用一些不引起免疫球蛋白聚合、变性等的纯化方法及条件。
2、应验证所用的纯化方法能去除可能存在的非目标产物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、用于生产腹水抗体的刺激物、内毒素、其它热原质、培养液成分或层析柱析出成分等。
3、应验证所用的纯化方法能有效的去除/灭活病毒。
4、连续产生的各批产品必须符合质检要求，批间具有良好的重复性。
5、纯化后处理
必要时对纯化后抗体采用适宜方法进行处理。